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定性化學(xué)分析范文第1篇

關(guān)鍵詞：桑蠶絲；柞蠶絲；牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維；硫酸法

牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維是以牛乳作為基本原料，經(jīng)脫水、脫油、脫脂、分離、提純，使之成為一種具有線型大分子結(jié)構(gòu)的乳酪蛋白；再與聚丙烯腈進(jìn)行共混、交聯(lián)、接枝，制備成紡絲原液；最后通過濕法紡絲成纖、固化、牽伸、干燥、卷曲、定型、短纖維切斷（長絲卷繞）而成的一種動(dòng)物蛋白纖維[1]。紡織品中牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維和桑蠶絲/柞蠶絲混紡時(shí)，現(xiàn)行的紡織標(biāo)準(zhǔn)FZ/T 01103―2009《紡織品 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維混紡產(chǎn)品 定量化學(xué)分析方法》[2]沒有這種混紡產(chǎn)品的定量分析方法，若按國標(biāo)GB/T 2910.4―2009 《紡織品 定量化學(xué)分析 第4部分：某些蛋白質(zhì)纖維與某些其他纖維的混合物（次氯酸鹽法）》[3] 進(jìn)行定量化學(xué)分析，因次氯酸鹽能同時(shí)溶解蠶絲和牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維中的牛奶蛋白，此方法只適用于牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維中蛋白比例已知的混紡產(chǎn)品，當(dāng)牛奶蛋白和聚丙烯腈的比例未知時(shí)，則無法對(duì)混紡產(chǎn)品進(jìn)行定量分析，檢測(cè)兩種纖維的含量。而實(shí)際檢測(cè)工作中，絕大部分樣品都未知牛奶蛋白的比例，為解決這一問題，本文參照FZ/T 01057―2007《紡織纖維鑒別試驗(yàn)方法 第4部分：溶解法》[4] 、GB/T 2910―2009《紡織品 定量化學(xué)分析》[2]和AATCC 20A―2011《纖維分析：定量》[5]，通過蠶絲和牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的溶解試驗(yàn)，篩選合適的試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件，探討牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品定量化學(xué)分析的問題。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器

BRAND干燥烘箱[控溫（105±3）℃]、IKA陶瓷電加熱板（帶磁力攪拌）、SARTORIUS分析天平（精度0.1mg）、KASEN振蕩水浴鍋、SHZ-D（Ⅲ）真空泵、砂芯坩堝（30mL，80μm～120μm）、抽濾瓶（帶可固定坩堝適配橡膠圈）、干燥器（帶硅膠）、具塞三角燒瓶（250mL）。

1.2 試劑和試樣

30%雙氧水、低亞硫酸鈉、磷酸鈉（分析純，凌峰化學(xué)試劑公司）；氯化鈉、丙酮、次氯酸鈉、稀氨水溶液[200mL的濃氨水（ρ=0.880g/mL）用水稀釋至1L]、氫氧化鈉（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）； 36%～38%濃鹽酸、95%～98%濃硫酸（分析純，廣州市東紅化工廠）； N，N-二甲基甲酰胺（分析純，西隴化工）；貼襯布桑蠶絲（上海市紡織工業(yè)技術(shù)監(jiān)督所）、牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維（科紡實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）、柞蠶絲（庫存樣品）。

1.3 試驗(yàn)原理

在不同化學(xué)性質(zhì)的試劑中進(jìn)行蠶絲和牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的溶解試驗(yàn)，選擇合適的試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件。具體如下：

（1）試驗(yàn)方法的選擇：試驗(yàn)并評(píng)價(jià)桑蠶絲、柞蠶絲、牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維在不同試劑中的溶解性，選出合適的試驗(yàn)方法。

（2）試驗(yàn)條件的選擇：利用（1）中選出的方法，在不同試驗(yàn)條件下進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)蠶絲的溶解情況和牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的損失程度及穩(wěn)定性，選出合適的試驗(yàn)條件。

1.4 計(jì)算

試樣損失率ω（%）=100（mm0） / m0（m0――溶解前干燥質(zhì)量；m――溶解后干燥質(zhì)量）。

2 試驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維中牛奶蛋白的含量

參照FZ/T 01103―2009，在20℃的溫度下，用1mol/L次氯酸鈉溶解試樣40min，把牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維中的牛奶蛋白從已知干燥質(zhì)量試樣中溶解去除，收集殘留物、清洗、烘干、稱重、計(jì)算。經(jīng)計(jì)算牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維中牛奶蛋白的含量為16.7%。

2.2 蠶絲、牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的溶解性

選用桑蠶絲、柞蠶絲和牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的試樣，在不同的試劑中溶解30min。

由表1可知，牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的耐酸和耐堿性能強(qiáng)于蠶絲，耐有機(jī)試劑的性能弱于蠶絲。由此推測(cè)，纖維成分分析常用的試劑中有以下幾種試劑可能適用于牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品定量分析的要求：氫氧化鈉（NaOH）、鹽酸（HCl）、硫酸（H2SO4）、N，N-二甲基甲酰胺（C3H7NO）。理論上，試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過修正后，這些試劑均可用于混紡產(chǎn)品的定量分析。但為了得到最佳試驗(yàn)效果，需進(jìn)行溶解試驗(yàn)的比較分析，選出最佳試驗(yàn)效果的試劑，使之能夠完全溶解一種纖維，同時(shí)對(duì)剩下纖維的損失小且穩(wěn)定。

2.3 氫氧化鈉法

試驗(yàn)表明，在濃度≥2.5g/L氫氧化鈉（NaOH）的沸騰溶液中，試驗(yàn)進(jìn)行到 30min時(shí)蠶絲才完全溶解，而在相同試驗(yàn)條件下牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維部分溶解，剩余物為膠體狀態(tài)，不能進(jìn)行定量分析，無法滿足檢測(cè)的要求。

2.4 N，N-二甲基甲酰胺法

試驗(yàn)表明，溫度90℃、溶解時(shí)間1h的試驗(yàn)條件下，N，N-二甲基甲酰胺法溶解牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維和蠶絲的混合物，聚丙烯腈完全溶解，剩余物中牛奶蛋白粘附在蠶絲上，且兩者化學(xué)性質(zhì)相似，難以通過物理或化學(xué)方法分離，不適合定量分析。

2.5 鹽酸法

2.5.1 蠶絲在鹽酸溶液中的溶解性

選用桑蠶絲和柞蠶絲試樣在不同試驗(yàn)條件的鹽酸溶液中進(jìn)行溶解試驗(yàn)。

由表2可知：①試驗(yàn)溫度20℃時(shí)，桑蠶絲在鹽酸濃度≥29%的溶液中，接近10min時(shí)完全溶解；柞蠶絲在鹽酸濃度≥35%的溶液中，接近10min時(shí)完全溶解；②溫度每升高20℃，溶解桑蠶絲和柞蠶絲所需鹽酸溶液的濃度約降低1%。由此可知，溫度對(duì)蠶絲溶解性能的影響不明顯，為簡(jiǎn)便操作、減少能耗、減輕鹽酸的揮發(fā)性對(duì)環(huán)境的影響，選用室溫條件下的溫度點(diǎn)20℃作為試驗(yàn)溫度。

2.5.2 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維在鹽酸溶液中的溶解性

2.5.2.1 鹽酸濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響

溫度20℃、時(shí)間10min的試驗(yàn)條件下，測(cè)試鹽酸濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響。

由表3可知，牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維在鹽酸濃度29%的溶液中損失率為4.04%；在35%溶液中損失率為6.65%；在濃鹽酸中損失率為11.77%。鹽酸溶液的濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維質(zhì)量損失的影響比較明顯，濃度越高損失越大。為使蠶絲能完全溶解，而牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的損失小，選用鹽酸的濃度為35%。

2.5.2.2 溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響

溫度20℃時(shí)，在35%的鹽酸中測(cè)試溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性腈綸纖維的影響。

由表4可知：牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維20℃時(shí)，在35%的鹽酸溶液中，溶解10min的損失率為6.65%；溶解20min損失率為12.60%；溶解30min損失率為14.43%。溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維損傷的影響較大，時(shí)間越短纖維的損失越小。

因此，鹽酸法定量分析牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品時(shí)，可選鹽酸濃度35%、溫度20℃、溶解時(shí)間10min作為試驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，此時(shí)溶解蠶絲，剩余牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維，剩余纖維的損失率為6.65%。

2.6 硫酸法

2.6.1 蠶絲在硫酸溶液中的溶解性

選用桑蠶絲和柞蠶絲試樣在不同試驗(yàn)條件的硫酸溶液中進(jìn)行溶解試驗(yàn)。

由表5可知：①試驗(yàn)溫度20℃時(shí)，桑蠶絲在硫酸濃度≥52%的溶液中，10min內(nèi)溶解完全；柞蠶絲在硫酸濃度≥60%的溶液中，10min內(nèi)溶解完全；②溫度每升高20℃，溶解桑蠶絲和柞蠶絲所需硫酸溶液的濃度約降低1%～3%。由此可知，溫度對(duì)蠶絲溶解性能的影響不明顯，為了便于試驗(yàn)操作、減少能耗，可選用室溫條件下的溫度點(diǎn)20℃作為試驗(yàn)溫度。

2.6.2 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維在硫酸溶液中的溶解性

2.6.2.1 硫酸濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響

溫度20℃、時(shí)間10min的試驗(yàn)條件下，測(cè)試硫酸濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響。

由表6可知，牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維20℃時(shí)，溶解10min，在53%的硫酸溶液中損失率為0.96%；在60%的溶液中損失率為2.20%；在70%的溶液中損失率為8.02%。硫酸溶液的濃度對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維損失有明顯的影響，濃度越高損失越大。

2.6.2.2 溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響

溫度20℃時(shí)，在60%的硫酸中測(cè)試溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的影響。

由表7可知：牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維20℃時(shí)，在60%的硫酸溶液中，溶解10min的損失率為2.20%；溶解20min損失率為2.28%；溶解30min損失率為2.33%。由此可知，溶解時(shí)間對(duì)牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的損傷沒有明顯影響，在10min～30min的溶解時(shí)間內(nèi)損失率維持在2.20%～2.33%之間，損失比較穩(wěn)定。考慮溶解時(shí)間的長短和實(shí)際檢測(cè)中染料、整理劑等對(duì)樣品溶解性能的影響，選用20min作為溶解時(shí)間。

2.7 試驗(yàn)方法和條件的比較

2.7.1 試驗(yàn)方法的選擇

由以上試驗(yàn)可知：氫氧化鈉法對(duì)剩余物的損傷大，不能滿足定量分析檢測(cè)的要求；N，N-二甲基甲酰胺法無法很好地分離擬溶解的組分，不能滿足定量化學(xué)分析檢測(cè)的要求；鹽酸法和硫酸法相比，鹽酸對(duì)剩余物的損傷大，試驗(yàn)結(jié)果誤差大，且鹽酸揮發(fā)性較大不利于試驗(yàn)環(huán)境。因此，經(jīng)分析比較硫酸法是較為合適的定量分析方法。

2.7.2 試驗(yàn)條件的選擇

由硫酸法的試驗(yàn)結(jié)果可知：兼顧蠶絲的溶解性、牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的溶解損傷、溶解時(shí)間的長短和實(shí)際檢測(cè)中染料、整理劑等對(duì)樣品溶解性能的影響，可以選擇硫酸濃度為60%、溫度為20℃、溶解時(shí)間為20min的試驗(yàn)條件作為牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維和蠶絲混紡產(chǎn)品的定量化學(xué)分析測(cè)試的試驗(yàn)條件。

3 結(jié)論

（1）牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的耐酸耐堿性能強(qiáng)于蠶絲。

（2）鹽酸法和硫酸法均可用作牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品定量化學(xué)分析，但硫酸法操作更簡(jiǎn)便，試驗(yàn)結(jié)果誤差更小。

（3）牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品在硫酸濃度60%、溫度20℃、溶解時(shí)間20min的試驗(yàn)條件下進(jìn)行溶解試驗(yàn)，蠶絲能夠溶解完全，牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維的質(zhì)量損失相對(duì)較小且穩(wěn)定，可以滿足混紡產(chǎn)品定量化學(xué)分析檢測(cè)的要求。

（4）硫酸法定量分析牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維/蠶絲混紡產(chǎn)品，可作為FZ/T 01103―2009《紡織品 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維混紡產(chǎn)品 定量化學(xué)分析方法》的補(bǔ)充方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 莫靖昱，陸艷. 腈綸基牛奶纖維的定性鑒別方法探討[J].印染助劑，2013（5）：45-47.

[2] FZ/T 01103―2009 紡織品 牛奶蛋白改性聚丙烯腈纖維混紡產(chǎn)品 定量化學(xué)分析方法[S].

[3]GB/T 2910―2009 紡織品 定量化學(xué)分析[S].

[4] FZ/T 01057―2007 紡織纖維鑒別試驗(yàn)方法 第4部分：溶解法[S].

定性化學(xué)分析范文第2篇

關(guān)鍵詞：校企合作；規(guī)?；挥唵闻囵B(yǎng)；就業(yè)率；穩(wěn)定性

化學(xué)工程技術(shù)學(xué)院共設(shè)置3個(gè)專業(yè)群11個(gè)專業(yè)。在校生合計(jì)3456人，其中2011屆畢業(yè)生1308人、2012屆畢業(yè)生1174人、2013屆畢業(yè)生974人。根據(jù)學(xué)院就業(yè)部門要求，按照就業(yè)強(qiáng)度10人/單位配置，化工學(xué)院需聯(lián)系100家以上企業(yè)，每年需要提供3000個(gè)以上崗位供畢業(yè)生選擇，就業(yè)與校企合作工作壓力和責(zé)任突出。

1 2011-2013就業(yè)情況統(tǒng)計(jì)

1.1 2011屆畢業(yè)生就業(yè)

化工學(xué)院2011屆畢業(yè)生總?cè)藬?shù)為1308人，其中08大專26個(gè)班1131人，04高專4個(gè)班177人。學(xué)生規(guī)?；蜆I(yè)集中在2010年10-11月專場(chǎng)招聘和學(xué)校雙選會(huì)上，有近半數(shù)畢業(yè)生借社會(huì)和家庭關(guān)系零散就業(yè)。2010年2月統(tǒng)計(jì)實(shí)習(xí)率81%、協(xié)議就業(yè)率51.3%，對(duì)統(tǒng)計(jì)有10人左右的就業(yè)單位現(xiàn)場(chǎng)檢查和指導(dǎo)并密切聯(lián)系企業(yè)，到6月底統(tǒng)計(jì)就業(yè)率99%，協(xié)議就業(yè)率為94.7%，對(duì)口就業(yè)率達(dá)87%。據(jù)畢業(yè)返校統(tǒng)計(jì)，在企業(yè)生產(chǎn)一線、基層部門就業(yè)人數(shù)達(dá)80%以上。

1.2 2012屆畢業(yè)就業(yè)

化工學(xué)院2012屆畢業(yè)生28個(gè)班1143名學(xué)生，其中2011年校企業(yè)合作單位86家，選擇5家具備教學(xué)條件、規(guī)模較大的企業(yè)進(jìn)行訂單培養(yǎng)試點(diǎn)，當(dāng)年實(shí)現(xiàn)訂單就業(yè)學(xué)生114人，占畢業(yè)生總量的10%。2011年9-10月選擇有規(guī)模需求的企業(yè)進(jìn)行專場(chǎng)招聘，單位招聘10人以上就業(yè)率大幅度提升。本次頂崗實(shí)習(xí)實(shí)行網(wǎng)上系統(tǒng)管理，訂單班有專門老師全程指導(dǎo)和跟蹤，開展分組現(xiàn)場(chǎng)檢查和指導(dǎo)，到6月底統(tǒng)計(jì)就業(yè)率99%，實(shí)現(xiàn)首次派遣率達(dá)97%以上，協(xié)議就業(yè)率達(dá)95%，就業(yè)率和派遣率數(shù)據(jù)超過去年同期水平。據(jù)畢業(yè)返校統(tǒng)計(jì)在企業(yè)生產(chǎn)一線、基層部門就業(yè)人數(shù)達(dá)85%以上。

1.3 2013屆畢業(yè)生就業(yè)

化工學(xué)院2013屆畢業(yè)生26個(gè)班813名學(xué)生進(jìn)行0.5實(shí)踐教學(xué)。根據(jù)學(xué)校教學(xué)改革要求，在2013屆畢業(yè)生中實(shí)施2+0.5+0.5教學(xué)，化工學(xué)院開發(fā)校企緊密型合作單位，新增35家合作企業(yè)，完成12個(gè)訂單班共466人、9個(gè)校外實(shí)踐教學(xué)班共217人、2個(gè)住校實(shí)驗(yàn)教學(xué)班共78人，另有3個(gè)中外班共52人。在2012年10月進(jìn)行20家單位的專場(chǎng)招聘、11月有近50家企業(yè)參加雙選會(huì)招聘，提供就業(yè)實(shí)習(xí)崗位1600個(gè)，為化工學(xué)院校內(nèi)外教學(xué)班347名學(xué)生提供了良好的就業(yè)渠道。至2012年12月統(tǒng)計(jì)進(jìn)入單位簽訂就業(yè)實(shí)習(xí)有601人，尚未就業(yè)205人，參軍休學(xué)7人，實(shí)習(xí)率達(dá)97%以上，協(xié)議就業(yè)率達(dá)47.5%。

2 促進(jìn)學(xué)院就業(yè)發(fā)展的因素分析

2.1 校企合作推動(dòng)就業(yè)

化工學(xué)院有化工、環(huán)境和食品三大類就業(yè)群體，為滿足不同專業(yè)、地區(qū)和成長要求的學(xué)生，不斷開發(fā)校企合作單位，加強(qiáng)聯(lián)系和走訪，以真誠的合作愿望建立校企合作關(guān)系。校企合作與就業(yè)實(shí)習(xí)基地企業(yè)增長達(dá)100%以上，緊密型合作增長達(dá)100%，就業(yè)崗位數(shù)增長50%以上。通過校企合作的深入開展，企業(yè)能夠提供的就業(yè)崗位數(shù)量不斷增加，一方面，給學(xué)生的就業(yè)與實(shí)習(xí)提供更多的選擇空間，另一方面，也為應(yīng)對(duì)可能的就業(yè)危機(jī)與就業(yè)壓力做好充足的準(zhǔn)備。因此可以說，校企合作是學(xué)院就業(yè)工作的保障，也是學(xué)院就業(yè)工作不斷取得新的成績的基礎(chǔ)。

2.2 集中就業(yè)實(shí)習(xí)有利頂崗實(shí)習(xí)指導(dǎo)的開展

化工學(xué)院在2011年組織頂崗實(shí)習(xí)指導(dǎo)和管理老師現(xiàn)場(chǎng)檢查，對(duì)單位5人以上38家企業(yè)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)528人，占總?cè)藬?shù)的43%（扣除本科生）。2012年對(duì)單位5人以上23家企業(yè)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)436人，占總?cè)藬?shù)的44%（扣除本科生）。2012年對(duì)校外21家企業(yè)2+0.5+0.5教學(xué)實(shí)踐進(jìn)行檢查和指導(dǎo)683人，占總?cè)藬?shù)的100%（扣除本科生和校內(nèi)班）。集中實(shí)習(xí)能夠使得實(shí)習(xí)指導(dǎo)與管理教師更方便的與學(xué)生、特別是企業(yè)取得聯(lián)系，達(dá)到校、企對(duì)學(xué)生的共同教育與培養(yǎng)的目標(biāo)，同時(shí)，也有利于實(shí)現(xiàn)對(duì)于學(xué)生的現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)與培養(yǎng)，有效的保證頂崗實(shí)習(xí)的質(zhì)量。

2.3 訂單培養(yǎng)有利于提高就業(yè)率和就業(yè)的穩(wěn)定性

化工學(xué)院在2011年對(duì)2012屆畢業(yè)生開辦5個(gè)訂單共135人，單位就業(yè)達(dá)84%、穩(wěn)定達(dá)65%，占總就業(yè)的11%。2012年對(duì)2013屆畢業(yè)生開辦12個(gè)訂單共466人，單位就業(yè)達(dá)75%，占總就業(yè)的43.3%。

3 就業(yè)成果總結(jié)

1、加強(qiáng)校企合作，密切校企關(guān)系，建立校企合作協(xié)議和就業(yè)實(shí)習(xí)基地，增加合作企業(yè)數(shù)量，一方面能夠給學(xué)生的就業(yè)與實(shí)習(xí)提供更多的選擇空間，有于提高學(xué)生就業(yè)的質(zhì)量，滿足學(xué)生個(gè)性化和針對(duì)性的就業(yè)需求。另一方面，也為應(yīng)對(duì)可能的就業(yè)危機(jī)與就業(yè)壓力做好充足的準(zhǔn)備。因此，校企合作是學(xué)院就業(yè)工作的保障，也是學(xué)院就業(yè)工作不斷取得新的成績的基礎(chǔ)。

定性化學(xué)分析范文第3篇

關(guān)鍵詞：ABO血型 臨床用血 平頂山

中圖分類號(hào)：R457.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1004-7484（2011）03-0237-03

新型農(nóng)村及新型城鎮(zhèn)居民合作醫(yī)療給廣大人民群眾帶來了實(shí)惠，醫(yī)保覆蓋面的擴(kuò)大導(dǎo)致臨床用血的激增，形成了庫存血液告急和偏型的常態(tài)化等無法回避的問題。本文對(duì)2005-2010年平頂山市無償獻(xiàn)血者的ABO血型分布的動(dòng)態(tài)資料進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，就其對(duì)新時(shí)期無償獻(xiàn)血的影響做出了分析，給出了應(yīng)對(duì)措施，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 資料來源

為平頂山市中心血站2005-2010六年間無償獻(xiàn)血者的ABO血型資料。

1.2 獻(xiàn)血者血型的確認(rèn)

1.2.1 試驗(yàn)儀器

RSP-150全自動(dòng)加樣儀，深圳產(chǎn)愛康血型儀 AK03A，日本久保田離心機(jī) KUBOTA-5310，

1.2.2 試劑均由長春生物制品研究所博德公司提供，經(jīng)中國藥品生物制品檢定所批批檢定合格，在有效期內(nèi)使用。同時(shí)留取獻(xiàn)血者雙份血液標(biāo)本，做血型正、反定型試驗(yàn)［1］，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，以其相符合者確認(rèn)之。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用四格表χ2檢驗(yàn)、行列法χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果 表-1，表-2。

3 分析

3.1 2006、2009兩年的獻(xiàn)血者年度增長率都超過了22%，六年間年獻(xiàn)血人數(shù)翻了一番多（表-1）。

07/08年度獻(xiàn)血者增長率最低，為2.39%；但其ABO血型總構(gòu)成比的差異卻顯示有顯著意義（P

通過對(duì)B型極差值做的比較（表-2第四組），發(fā)現(xiàn)六年來此血型的比重沒有差異（P>0.05）。結(jié)合第八組的比較（P

09/10的血型總構(gòu)成比沒有明顯差異（表-2，第六組比較）。但這是否說明年度無償獻(xiàn)血人群ABO血型構(gòu)成比進(jìn)入穩(wěn)定期，還有待觀察。

表-2第二組、第七組的比較，六年來A型采血比重與普查時(shí)A型的型別比有統(tǒng)計(jì)意義（P

六年來的O型構(gòu)成比與普查時(shí)的構(gòu)成比無顯著意義（表-2第九組）。但是六年來O型比率始終大于普查的比率，而實(shí)踐中仍時(shí)常有O型的偏型（偏少），其原因可能是：本地區(qū)臨床對(duì)O型血的需求旺盛（為什么會(huì)這樣，則需進(jìn)一步調(diào)查）；而本地區(qū)O型血相對(duì)偏少[2]，實(shí)踐中O型血易產(chǎn)生偏型（偏少），提示應(yīng)加強(qiáng)宣傳并加大O型血的采集力度。第十組說明本地區(qū)AB型血的供求處于平衡狀態(tài)，但對(duì)3.2.1項(xiàng)所述的AB型需求劇增時(shí)的情況應(yīng)積極應(yīng)對(duì)。

參考文獻(xiàn).

定性化學(xué)分析范文第4篇

關(guān)鍵詞 麻疹 強(qiáng)化免疫 免疫接種 流行病學(xué)特征 控制措施

中圖分類號(hào)：R183 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2013）16-0035-04

麻疹減毒活疫苗（measles attenuated live vaccine， MV）強(qiáng)化免疫活動(dòng)（supplementary immunization activities， SIA）指在統(tǒng)一時(shí)間里進(jìn)行麻疹免疫接種，以迅速有效地阻斷麻疹病毒傳播。根據(jù)衛(wèi)生部《2006-2012年全國消除麻疹行動(dòng)計(jì)劃》和上海市衛(wèi)生局相關(guān)要求，嘉定區(qū)于2010年9月開展針對(duì)8月齡～14歲人群的大規(guī)模麻疹疫苗強(qiáng)化免疫活動(dòng)。大規(guī)模強(qiáng)化免疫實(shí)施后，2011年嘉定區(qū)麻疹發(fā)病率顯著下降，但2012年麻疹疫情出現(xiàn)反彈?，F(xiàn)將嘉定區(qū)大規(guī)模麻疹疫苗強(qiáng)化免疫后麻疹流行病學(xué)特征分析如下。

1 材料與方法

1.1 資料來源

麻疹發(fā)病數(shù)據(jù)來源于中國疾病預(yù)防控制信息系統(tǒng)的麻疹監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)。麻疹病例流行病學(xué)信息均有2名及以上上海市嘉定區(qū)疾病預(yù)防控制中心專業(yè)人員調(diào)查，人口學(xué)資料來源于公安系統(tǒng)。麻疹疫苗強(qiáng)化免疫接種信息來源于上海市嘉定區(qū)疾病預(yù)防控制中心。

1.2 統(tǒng)計(jì)方法

采用描述流行病學(xué)方法，有關(guān)數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 麻疹流行病學(xué)特征

上海市嘉定區(qū)2009年麻疹發(fā)病率為8.01/10萬（69例），2010年嘉定區(qū)麻疹發(fā)病率為1.71/10萬（15例），當(dāng)年9月大規(guī)模麻疹疫苗強(qiáng)化免疫后無麻疹病例報(bào)告。2011年麻疹疫情下降明顯，發(fā)病率為0.34/10萬（5例），2012年麻疹疫情出現(xiàn)反彈，發(fā)病率再次上升到3.42/10萬（49例）。大規(guī)模強(qiáng)化免疫后，所有病例均為散發(fā)，無暴發(fā)疫情。

2.2 病例監(jiān)測(cè)

2011年嘉定區(qū)共報(bào)告疑似麻疹病例19例，確診病例5例，均為實(shí)驗(yàn)室診斷。2012年共接報(bào)疑似麻疹病例75例，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查核實(shí)疑似病例實(shí)際為71例，確診49例（臨床診斷1例，實(shí)驗(yàn)室診斷48例）。

2.2.1 時(shí)間分布

2011年5例有季節(jié)性特征，分布是4、6、8月各1例，5月2例。2012年3月以后，病例上升明顯，3-7月份病例相對(duì)集中，3-7月麻疹發(fā)病占總病例數(shù)的81.63%（圖1）。

2.2.2 地區(qū)分布

2011年5例分別為馬陸鎮(zhèn)2例，安亭鎮(zhèn)、江橋鎮(zhèn)、新成路街道各1例。2012年全區(qū)12個(gè)街道/鎮(zhèn)均有麻疹確診病例，發(fā)病前3位的鎮(zhèn)（街道）為流動(dòng)人口較多的江橋鎮(zhèn)（13例）、安亭鎮(zhèn)（9例）和馬陸鎮(zhèn)（8例）。

2.2.3 人群分布

2011年麻疹確診病例均為女性，其中本市戶籍2例，外地戶籍3例。2012年49例確診病例中，男性31例，女性18例；本市戶籍15例，外地戶籍34例。2011年和2012年確診的54例麻疹病例以

2.2.4 醫(yī)院暴露史及就診史

2011年5例麻疹確診病例中2例發(fā)病前7～21 d內(nèi)有醫(yī)院暴露史。2012年麻疹病例潛伏期內(nèi)有外出史者6例；病例發(fā)病前7～21 d內(nèi)有醫(yī)院暴露史比例較高，占38.78%（19/49）；其中1名患者有3家醫(yī)院暴露史，4名患者發(fā)病前有2家醫(yī)院暴露史，另外14名患者發(fā)病前7～21 d曾有1家醫(yī)院暴露史。特別在疫情早期，4月15日之前發(fā)病的18例病例中，12例有潛伏期內(nèi)醫(yī)院暴露史。

2.3 麻疹減毒活疫苗強(qiáng)化免疫信息

上海市嘉定區(qū)2001年在全區(qū)范圍內(nèi)開始實(shí)施麻疹疫苗強(qiáng)化免疫活動(dòng)，對(duì)象主要是“民工子弟學(xué)?！睂W(xué)生、0～6歲非常住戶口兒童。強(qiáng)化免疫活動(dòng)以查漏補(bǔ)種為主要形式，注重實(shí)效，主要減少“零”劑次兒童數(shù)，消除可能存在的免疫空白。2009-2012年8月齡～14歲兒童麻疹疫苗強(qiáng)化免疫報(bào)告接種率均在95.00%以上。2010年大規(guī)模麻疹疫苗強(qiáng)化免疫期間，共接種118 816人次，報(bào)告接種率為94.45%（118 816/12 5794）。自2008年起為提高人群免疫水平，降低麻疹發(fā)病率，嘉定區(qū)擴(kuò)大了麻疹疫苗接種范圍，對(duì)轄區(qū)內(nèi)重點(diǎn)人群開展麻疹疫苗的查漏補(bǔ)種工作，對(duì)象包括外來務(wù)工人員、1970年以后出生的醫(yī)護(hù)人員、教師及漏種的外來兒童等。2012年開始以各鎮(zhèn)/街道前一年常住人口的2%作為成人麻疹疫苗接種指標(biāo)，并將麻疹疫情防控和麻疹接種納入鎮(zhèn)/街道的年度考核指標(biāo)。2009-2012年共為成人接種麻疹類疫苗68 995劑次（表1， 2）。

3 討論

開展MV SIAs已被不少國家和地區(qū)證明是消除麻疹的主要策略。上海市嘉定區(qū)2001年開始實(shí)施麻疹疫苗強(qiáng)化免疫活動(dòng)，2010年大規(guī)模麻疹強(qiáng)化免疫后僅1年疫情回升較快，與MV強(qiáng)化免疫除能降低目標(biāo)兒童麻疹發(fā)病率外，還能夠減少非目標(biāo)人群暴露于傳染源的機(jī)會(huì)，從而降低全人群的發(fā)病率，甚至能阻斷麻疹病毒傳播[1]的報(bào)道不符。2010年大規(guī)模麻疹疫苗強(qiáng)化免疫1年后，麻疹疫情再次高發(fā)，時(shí)間分布與石國政等的報(bào)道[2]一致；地區(qū)上所有鎮(zhèn)/街道都有病例報(bào)告，但病例分布相對(duì)集中；年齡呈現(xiàn)“兩頭多，中間少”的雙移位特征，病例中潛伏期有醫(yī)院暴露史的比例較高。消除麻疹除要做好包括常規(guī)免疫、強(qiáng)化免疫和應(yīng)急免疫接種外，還應(yīng)做好以下幾個(gè)方面的工作。

3.1 高病例監(jiān)測(cè)敏感性

《2006-2012年全國消除麻疹行動(dòng)計(jì)劃》明確到2012年，全國麻疹發(fā)病率應(yīng)控制在

3.2 加強(qiáng)傳染源管理

控制傳染源是控制麻疹流行的重要途徑，特別應(yīng)注意醫(yī)療場(chǎng)所的接觸傳染，由于麻疹患者未出疹前主要表現(xiàn)為急性上呼吸道感染癥狀，即使很有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師也難以作出診斷。而麻疹在出疹前就有很強(qiáng)的傳染性，在未作出診斷前，醫(yī)務(wù)人員往往未對(duì)其進(jìn)行隔離，易感者接觸后很容易患病。上海市嘉定區(qū)2011-2012年麻疹病例潛伏期內(nèi)有醫(yī)院暴露史的比例為38.89%，2012年疫情前期高達(dá)66.67%，說明麻疹流行期間傳染源并未得到嚴(yán)格及時(shí)的管理。2012年病例中此次發(fā)病最多去過3家醫(yī)院，先后就診7次，平均就診醫(yī)院1.96家，就診次數(shù)為3.12次?；颊咴诖似陂g很有可能傳染給其他易感者。西非、南非、美國等也有報(bào)道在消除麻疹后期由于輸入性病例在醫(yī)院引起的麻疹暴發(fā)[3-4]。

加強(qiáng)對(duì)傳染源的及時(shí)發(fā)現(xiàn)和管理，減少暴露，是阻斷麻疹傳播的重要措施。一是各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)在麻疹高發(fā)季節(jié)需要對(duì)有呼吸道癥狀、發(fā)熱癥狀的患者進(jìn)行預(yù)檢分診、排查和分流，防止醫(yī)源性感染[5]。二是通過健康教育，增強(qiáng)群眾自我保護(hù)意識(shí)，盡量避免接觸到傳染源。

3.3 小月齡和成人病例的免疫問題

2011年和2012年確診的54例麻疹病例以

3.4 保護(hù)未及時(shí)免疫和免疫失敗兒童

上海市嘉定區(qū)2011-2012年麻疹疫苗常規(guī)免疫和強(qiáng)化免疫覆蓋年齡麻疹病例7例。3例8～11月齡兒童因患病未能接種；1～14歲兒童中1例因血小板減少性紫癜未接種麻疹疫苗，2例1歲兒童已接種麻疹風(fēng)疹疫苗，另1例13歲學(xué)生接種4劑次麻疹類疫苗后發(fā)病。有研究表明，在初次接種MV后有5.00%～15.00%的接種者不產(chǎn)生接種反應(yīng)[10]。麻疹是一種傳染性很強(qiáng)的急性呼吸道傳染病，沒有免疫力的情況下對(duì)麻疹病毒普遍易感，對(duì)于患病未及時(shí)免疫和免疫失敗兒童唯有通過減少醫(yī)院暴露、患者接觸等才能使其免于感染。

參考文獻(xiàn)

[1] Maria C， Jose C， Vanda A. Predictors related to the occurrence of a measles epidemic in the city of Sao Paulo in 1997[J]. Pan AmJ Public Health， 2000， 7（6）： 359-365.

[2] 石國政. 嘉定區(qū)麻疹疫情變遷和人群免疫水平現(xiàn)狀研究[M]. 上海： 復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院， 2008： 17.

[3] Akramuzzaman SM， Cutts FT， Hossain MJ， et al. Measles vaccine effectiveness and risk factors for measles in Dhaka， Bangladesh[J]. Bull World Health Organ， 2002， 80（10）： 776-782.

[4] Marshall TM， Hlatswayo D， Schoub B. Nosocomial outbreaks-A potential threat to the elimination of measles？[J]. J Infect Dis， 2003， 187 （Suppl 1）： S97-101.

[5] 衛(wèi)生部. 醫(yī)療機(jī)構(gòu)傳染病預(yù)檢分診管理辦法[S]. 北京： 2005.

[6] 熊傳龍， 陳超， 稅鐵軍， 等. 德惠市0～3歲兒童麻疹患者發(fā)病危險(xiǎn)因素分析[J]. 中國計(jì)劃免疫， 2006， 12（5）： 350-352.

[7] 朱鑫， 謝清梅， 任蘊(yùn)慧， 等. 一起醫(yī)院內(nèi)暴露導(dǎo)致的麻疹爆發(fā)疫情分析[J]. 中國疫苗和免疫， 2008， 14（5）： 398-402.

[8] 林獻(xiàn)丹， 程慧健， 王希江， 等. 溫州市麻疹流行因素調(diào)查分析[J]. 中國計(jì)劃免疫， 2005， 11（6）： 476-478.

[9] 雷水賢. 54例麻疹患者流行病學(xué)調(diào)查分析[C]//2007年傳染病診治高峰論壇暨浙江省感染病學(xué)、肝病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論匯編. 杭州： 浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)， 2007： 287-288.

定性化學(xué)分析范文第5篇

摘要：目的：探討人臍血單個(gè)核細(xì)胞的分離培養(yǎng)和誘導(dǎo)后神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物mRNA的表達(dá)，并觀察其致瘤性。方法：使用密度梯度離心法得到臍血單個(gè)核細(xì)胞，用體外貼壁生長的方法獲得臍血間質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。觀察培養(yǎng)過程中臍血MSCs形態(tài)的變化，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞表面抗原的表達(dá)。使用NGF和RA聯(lián)合誘導(dǎo)后，用RT―PCR方法鑒定誘導(dǎo)前后神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)志物巢蛋白(Nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表達(dá)；收集培養(yǎng)后7d的MSCs，接種于裸鼠皮下，觀察是否有增生物的出現(xiàn)，并觀察細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果：臍血單個(gè)核細(xì)胞貼壁生長后大部分細(xì)胞呈梭形，誘導(dǎo)后可分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)該細(xì)胞不表達(dá)CD34，CDlla和CD11b，強(qiáng)表達(dá)CD29，符合MSCs特征。誘導(dǎo)后，NSCs表面標(biāo)志Nestin及Musshi-1表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，48h達(dá)高峰，然后逐漸減弱：細(xì)胞接種后12周，在裸鼠皮下不能形成腫瘤，與對(duì)照組相比，細(xì)胞形態(tài)學(xué)未出現(xiàn)惡性變化。結(jié)論：臍血中存在MSCs。分離后可以體外擴(kuò)增，誘導(dǎo)后分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，并表達(dá)NSCs表面標(biāo)志。在裸鼠體內(nèi)不具有成瘤性。臍血能夠成為NSCs的新來源。

關(guān)鍵詞：臍血單個(gè)核細(xì)胞；神經(jīng)干細(xì)胞；誘導(dǎo)分化；巢蛋白：致瘤性

中圖分類號(hào)：R741

干細(xì)胞是指具有自我更新與多向分化潛能的細(xì)胞，它們?cè)诩?xì)胞療法、基因治療、發(fā)育學(xué)研究、藥理及毒理學(xué)等研究中己顯示出無可比擬的作用和優(yōu)越性。近年來，神經(jīng)干細(xì)胞fneural stem eells,NSCs)移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起人們的普遍關(guān)注，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中獲得了較好的療效，NSCs被認(rèn)為是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的良好載體。但是，由于來源的局限，NSCs的應(yīng)用受到限制。成體干細(xì)胞是存在于發(fā)育成熟個(gè)體組織中的可自我更新和分化為原組織所有細(xì)胞類型的未分化細(xì)胞。根據(jù)其發(fā)育潛能可分為全能干細(xì)胞、多胚層多能干細(xì)胞、單胚層多能干細(xì)胞和定向?qū)Ｄ芨杉?xì)胞。存在于骨髓基質(zhì)中的間質(zhì)干細(xì)胞(mesenehymal stem cdls,MSCs)是研究最早和最為深入的一類多能干細(xì)胞，其來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，具有廣泛的分化潛能，已經(jīng)有多項(xiàng)研究顯示，外源骨髓MSCs移植入腦內(nèi)，可以分化為神經(jīng)細(xì)胞。表達(dá)神經(jīng)元特異性標(biāo)志蛋白。因?yàn)槟殠а獊碓吹腗SCs和骨髓MScs有極其一致的生物學(xué)特性，且易于采集、制備及保存。免疫反應(yīng)性低，因此可能更易于在臨床上使用。本研究結(jié)合密度梯度離心和體外貼壁生長的方法得到臍血MSCs，誘導(dǎo)后檢測(cè)其NSCs標(biāo)志物Nesfin及Musashi-I的表達(dá)情況，并將培養(yǎng)后的臍血MSCs接種于裸鼠皮下，觀察臍血MSCs對(duì)裸鼠的致瘤性，為應(yīng)用于組織及其功能修復(fù)中提高該細(xì)胞的生物安全性提供新的依據(jù)。

1．材料和方法

1．1主垂試劑

高糖IMDM培養(yǎng)基(Gibco公司)；胎牛血清(Hyclone公司)；淋巴細(xì)胞分層液(Cibco公司)；RNA提取試劑Tfizol(invit-rogen公司)；氯仿、異丙醇為國產(chǎn)分析純?cè)噭?；DEPC水(sigma公司)；RT-PCR試劑盒(大連寶生物公司)；瓊脂糖(sigma公司)。

1．2實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1臍血間質(zhì)干細(xì)胞的體外分離和擴(kuò)增培養(yǎng)無菌條件下采集健康產(chǎn)婦足月妊娠順產(chǎn)或剖腹產(chǎn)的嬰兒臍帶血50～100md肝素抗凝，與0.01moL/pH7.4的PBS按1:1混勻，再與3％的明膠1:1混勻，靜置60min沉降紅細(xì)胞。吸上清離心，棄上清，用PBS制成單細(xì)胞懸液，疊加到相對(duì)密度1.077的淋巴細(xì)胞分離液上，2000dr/min離心20min，取界面層，加PBS制成單細(xì)胞懸液，離心洗滌3次，棄上清。所得細(xì)胞以1.0x102／cm2(T-25培養(yǎng)瓶)的密度接種于含有15％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)液(Hyclone公司，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5％的cm2、飽和濕度的孵箱內(nèi)培養(yǎng)，3d后換液，棄去懸浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的改變并照相。待細(xì)胞長到80％融合時(shí)，用2.5g/L的胰蛋白酶消化后傳代。

收集分離后1h、培養(yǎng)后36、48、72h和5d的細(xì)胞，離心洗滌，在顯微鏡下，臺(tái)盼藍(lán)染色、計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度備用。

1．2．2流式細(xì)胞儀檢測(cè)取擴(kuò)增一代的臍血間質(zhì)干細(xì)胞，PBS洗滌后用2．5 WE的胰蛋白酶消化后制成1:0x106的單細(xì)胞懸液，共7管，1號(hào)管和2號(hào)管為陰性對(duì)照，分別加入抗鼠的IgG-FITC和IgG-PE單克隆抗體各5ml，其余5管分別加入抗人的CD34-PE，CD31-FITC，CDl3-PE，CD29-PE，CD44單抗各5m1．室溫下孵育20min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1．2．3臍血間質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化取原代細(xì)胞，加入20ng/m1 NGF和RA聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)，收集誘導(dǎo)前，誘導(dǎo)后36、48、72 h、5d的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度備用。

1．2．4 RNA提取取誘導(dǎo)前，誘導(dǎo)后36、48、72h、5d的細(xì)胞各3x106個(gè)，融于1 mlTRIZOL試劑中，用吸管反復(fù)吹打后室溫下孵育5min。加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩后室溫下10min。4℃，12000r/min離心15min后將上層無色液體移入新的EP管中。加入異丙醇，室溫下放置10min，4℃，12000r/min離心10min棄去上清。加入75％乙醇，4℃，7500r/min離心5min，棄去上清液，風(fēng)干，加入DEPC處理的純凈水40μl溶解后，55℃孵育15min。

1．2．5 RT-PCR采用相關(guān)軟件設(shè)計(jì)引物，并由賽百盛生物工程公司合成。Nestin上游引物：5TCCTTTGACTTrCCTTGTC―TACCTCC 3，下游引物：5AAATCTGAAACTCAAGCACCA3：Musashi-l上游引物5TAATTCCTGTCCAGCAGTCTC3：下游引物5GAACCATCCCGTCCTGTATCAT3。對(duì)所提RNA進(jìn)行定量，取1μgRNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，在EP管中先后加入MgCL2×PCR buffer 1μl，RNase free H2O 3.75μl，dNTP lμ，RNase inhibor0.25μl，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl，oli-．go-dT接頭引物0.5μl，RNA樣品1μg，按照如下條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)30℃10min，48℃50min，99℃5min，50℃5min。合成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在EP管中依次加入下列物質(zhì)：Taq酶0.25μl，10xPCR buffer10μl，純凈水27.75μl，

特異性上下游引物各0.5μl。內(nèi)對(duì)照GAPDH上下游引物各0.5μl(30 μmol/L)，cDNA產(chǎn)物10μl，按照以下條件進(jìn)行PCR反應(yīng)。94℃預(yù)變性5min，94℃30s，57℃30s，72℃30s，30個(gè)循環(huán)后，72℃延伸7min。取5μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物加樣至含溴化乙錠(EB)20g/l的瓊脂糖凝膠中，在5V/cm下電泳60min，紫外透視儀下觀察結(jié)果，并用凝膠掃描成像系統(tǒng)照相，PCR定量分析軟件進(jìn)行分析。

1．2．6致瘤性取18只BALB/C裸鼠，隨機(jī)分為3組，背部皮下組、頸部皮下組、對(duì)照組各6只。收集培養(yǎng)7d的MSCs，用PBS重懸并調(diào)整細(xì)胞密度為1x107/ml，非麻醉狀態(tài)下，于裸鼠背部及頸部皮下分別無菌注射細(xì)胞懸液0.5ml，每只各4點(diǎn)．注入生理鹽水作為對(duì)照組。定期觀察，于3d、2周和8周取材，制作冰凍切片，HE染色，鏡下觀察。之后繼續(xù)觀察裸鼠生長情況至12周。

1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)以x＋s表示。采用SPSSl2.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的分析，顯著性水準(zhǔn)取α=0.05。

2．結(jié)果

2．1臍血單個(gè)核細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)后形態(tài)改變

培養(yǎng)前，臍血單個(gè)核細(xì)胞胞體較小，呈大小均一的圓形，直徑約17μm，顏色較深，住高倍鏡下可見其不停振動(dòng)；培養(yǎng)后，細(xì)胞胞體增大，有破骨樣細(xì)胞和梭形細(xì)胞兩種形態(tài)。破骨樣細(xì)胞胞體較大，呈圓形，多個(gè)核。梭形細(xì)胞大小不等。形態(tài)類似于骨髓MSCs，但較骨髓MSCs稍小。隨著時(shí)間的推移，破骨樣細(xì)胞減少而梭形細(xì)胞增多，即所需要的間質(zhì)干細(xì)胞

2．2臍血干細(xì)胞的鑒定

流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，擴(kuò)增后的臍血MSCs既不表達(dá)造血干細(xì)胞的特異性表面標(biāo)志CD34，也不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的表面標(biāo)志CD31，而CD29，CDl3，CD44等間質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志均為陽性。這表明臍血MSCs是臍血中一群區(qū)別于造血細(xì)胞的處于未分化狀態(tài)的非定向干細(xì)胞。

2．3誘導(dǎo)后NSCs標(biāo)志物的表達(dá)

Nestin和Musashi-1作為NSCs的標(biāo)志物已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。通過RT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后這兩個(gè)基因的表達(dá)，使用PCR定量分析軟件，分析各樣本的PCR光密度。將各樣本的PCR光密度值除以內(nèi)參GAPDH的PCR平均光密度值，重復(fù)測(cè)量5次。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Nestin RNA在誘導(dǎo)前細(xì)胞中低表達(dá)，誘導(dǎo)后36h逐漸升高(p＜0.05)，72h后開始降低(p＜0.05)：Musashi-1RNA在誘導(dǎo)前細(xì)胞中低表達(dá)，誘導(dǎo)后48h呈高表達(dá)(P＜0.05)。

2．4致瘤性

于注射后3d、2周和8周取材，肉眼觀察裸鼠背部無明顯增生物形成。組織學(xué)觀察接種3d局部有細(xì)胞團(tuán)塊存在，團(tuán)塊中心細(xì)胞部分壞死。2周時(shí)，細(xì)胞團(tuán)塊不明顯，大部分細(xì)胞被吸收。8周時(shí)，接種區(qū)組織結(jié)構(gòu)與未接種區(qū)無明顯區(qū)別。裸鼠存活12周以上，未見有腫瘤形成。與對(duì)照組比較，生長情況與皮膚狀況無明顯差別。

3．討論

NSCs具有自我更新和多分化潛能，為神經(jīng)系統(tǒng)疾病如帕金森病、阿爾海默病、卒中的功能重建帶來了希望。無論是作為腦組織移植的供體，還是作為體內(nèi)誘導(dǎo)分化的靶細(xì)胞，NSCs都為中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能重建和神經(jīng)再生提供了一條新的途徑。但NSCs來源有限，不適于展開大規(guī)模臨床應(yīng)用。如何獲取大量的NSC供臨床使用已成為當(dāng)今干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近年發(fā)現(xiàn)骨髓MSCs和造血干細(xì)胞(hematopoldie stem cells，HSCs)可分化成神經(jīng)細(xì)胞。由于臍血MSCs和骨髓MSCs有極其一致的生物學(xué)特性，臍血中的干細(xì)胞可能更原始，增殖分化能力更強(qiáng)；而且臍血來源廣泛、取材方便，所含有的干細(xì)胞數(shù)量更多。因此使用臍血干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為NSCs用于臨床研究有廣闊的應(yīng)前景。

目前國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)使用多種方法從臍血中分離干細(xì)胞，最常用的方法是利用臍血干細(xì)胞體外貼壁生長的特性，將其從造血系統(tǒng)細(xì)胞中分離。此外，還可利用密度梯度離心、流式細(xì)胞儀分離法和免疫磁珠等方法。最近，有學(xué)者采用負(fù)極免疫篩選及限制性稀釋的方法，分離得到臍血干細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀和免疫磁珠分離干細(xì)胞，操作方法復(fù)雜，花費(fèi)高昂而且實(shí)驗(yàn)條件要求高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合使用密度梯度離心和體外貼壁生長的方法獲得臍血MSCs，簡(jiǎn)單有效，成本低廉，對(duì)細(xì)胞損傷小，既適合各級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行基礎(chǔ)研究，也適合大規(guī)模將臍血細(xì)胞分離純化，用于臍血干細(xì)胞建庫㈣，應(yīng)用于臨床。

成功分離臍血干細(xì)胞后，使用NGF和RA聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)，用RT-PCR和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞表面標(biāo)志物巢蛋白(Nestin)和Musashi的表達(dá)。NeSin最早由Lendahl等發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)始于神經(jīng)胚形成時(shí)，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞遷移基本完成后，巢蛋白的表達(dá)量逐漸減少，并隨神經(jīng)細(xì)胞分化的完成而停止表達(dá)。此外，Sakakibara等亦鑒定出一種RNA結(jié)合蛋白Musashi，作為神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志物，Nestin和Musashi作為早期原始神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志物已被廣泛地應(yīng)用于NSCs的鑒定。本研究發(fā)現(xiàn)新鮮分離的臍血干細(xì)胞弱表達(dá)Nestin.不表達(dá)Musashi-I；誘導(dǎo)后，臍血干細(xì)胞的Nestin和Musashi-1表達(dá)域逐漸增強(qiáng)，48 h達(dá)到最強(qiáng)，進(jìn)而逐漸減少。這表明臍血細(xì)胞具有向神經(jīng)細(xì)胞分化的潛能。