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納米粉體范文第1篇

關(guān)鍵詞：納米粉體，α-Fe2O3，力學(xué)性能

 

眾所周知，氧化鐵具有許多優(yōu)異的性能，在催化、磁性存儲(chǔ)、氣敏、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用[1-3]。近年來(lái)，納米氧化鐵的制備已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，各種粒徑均勻、形貌可控的納米氧化鐵的研究已陸續(xù)被報(bào)道[4,5]。氧化鐵有多種存在形式，如α-Fe2O3、β-Fe2O3、γ-Fe2O3、ε-Fe2O3、Fe3O4等，它們?cè)谛阅苌嫌休^大差異。

水熱法是一種重要的合成技術(shù)，具有環(huán)境友好、相對(duì)低溫、產(chǎn)物純度高以及所得顆粒分散性好、粒徑分布窄、晶型好等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為一種重要的制備納米材料的新技術(shù)。論文參考。本研究以氯化鐵和氨水作為原料，通過(guò)水熱反應(yīng)，粒徑約為80nm左右的球形α-Fe2O3納米粉體。

1. 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和儀器

試劑：FeCl3·6H2O，NH3·H2O。以上試劑均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。

儀器：H-800透射電子顯微鏡，日本；D/Max-RB X-射線衍射儀，日本；馬弗爐，上海賀德試驗(yàn)設(shè)備有限公司；Spectrum 400紅外光譜儀，美國(guó)。論文參考。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

稱(chēng)取一定量的FeCl3·6H2O，配制成1.5mol/L的溶液，向該溶液中緩慢地滴加氨水，得紅褐色的凝膠狀樣品。將該樣品放入內(nèi)襯為聚四氟乙烯的高壓釜中，在120℃下反應(yīng)1min后冷卻至室溫。其中的沉淀物用蒸餾水洗滌數(shù)次后，在80℃干燥5h，得氧化鐵前驅(qū)體FeOOH。將前驅(qū)體于不同的溫度下煅燒，即可得α-Fe2O3納米粉體。

1.3樣品表征

應(yīng)用D/Max-RB X-射線衍射儀對(duì)樣品物相進(jìn)行表征，其條件為：Cu靶，Kα射線，λ=1.541Å，管電壓40kV，管電流100mA，掃描速度4°/min，掃描范圍(2θ)20-75°；應(yīng)用H-800透射電子顯微鏡對(duì)樣品的形貌和粒徑大小進(jìn)行了表征；應(yīng)用Spectrum 400紅外光譜儀對(duì)樣品進(jìn)行表征。

2. 結(jié)果與討論

2.1 IR分析

圖1是將前驅(qū)體煅燒到400℃時(shí)所得的超細(xì)氧化鐵樣品的IR圖，顯示了氧化鐵的特征吸收峰。570cm-1的峰為Fe-O的伸縮振動(dòng)，480cm-1的峰為Fe-O的彎曲振動(dòng)。這一結(jié)果，與文獻(xiàn)報(bào)道的球形α-Fe2O3納米粉體的紅外光譜相當(dāng)。

圖1. 400℃時(shí)樣品的紅外光譜

2.2 XRD、TEM分析

圖2為前驅(qū)體在不同的溫度下煅燒5h后所得的XRD圖。從圖中可以看出，200℃時(shí)前驅(qū)體已經(jīng)完全分解成α-Fe2O3。在400℃其峰形與200℃時(shí)的峰相比更加尖銳，表明結(jié)晶度有所提高。根據(jù)Scherrer公式D=Kλ/βcosθ可計(jì)算出200、400℃時(shí)灼燒的樣品的平均粒徑分別為30、50nm。由此可見(jiàn)，隨著溫度的升高，所得的晶粒粒徑逐步變大，這一結(jié)果也說(shuō)明了較高的溫度有利于晶粒的生長(zhǎng)。

圖2. 樣品在不同溫度下的XRD圖

圖3為在400℃時(shí)灼燒的樣品的TEM圖。論文參考。從圖上可以看出，顆粒為球形，粒徑大約在80nm左右，分散性較好，團(tuán)聚不明顯。

圖3. 樣品的TEM圖

2.3 α-Fe2O3納米粉體對(duì)聚乙烯的力學(xué)性能影響

為了考察α-Fe2O3對(duì)聚乙烯力學(xué)性能的影響，將α-Fe2O3（加入量為5%）與聚乙烯（PE）做成復(fù)合材料，具體過(guò)程如下：

在轉(zhuǎn)矩流變儀中經(jīng)過(guò)混合、壓縮、均化，最后擠入成型。為了達(dá)到α-Fe2O3粉體在有機(jī)體中的均勻分布需要多次混合，因此，從擠出成型機(jī)上出來(lái)的復(fù)合料可再經(jīng)過(guò)造粒機(jī)造粒，將這些復(fù)合的顆粒再轉(zhuǎn)入到流變儀配料入口。這樣反復(fù)多次，就可使得α-Fe2O3粉體在PE中均勻分布，最后形成以α-Fe2O3粉體作為增強(qiáng)體，以PE為基體的復(fù)合材料。取一定長(zhǎng)度和直徑的這種復(fù)合材料（長(zhǎng)條形），通過(guò)萬(wàn)能儀測(cè)其拉伸強(qiáng)度，與相同形狀的純的PE對(duì)比，可以觀察到經(jīng)過(guò)增強(qiáng)以后PE的拉伸強(qiáng)度明顯提高（圖4）。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可總結(jié)如下：

納米粉體范文第2篇

1．1納米材料的鑒別和表征

目前，由于不斷有研究工作揭示出與納米材料相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。企業(yè)為規(guī)避監(jiān)管，可能不會(huì)宣稱(chēng)其產(chǎn)品使用了納米材料或者在產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)用了納米技術(shù)。因?yàn)閲?guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局早在2006年就將納米產(chǎn)品從Ⅱ類(lèi)升級(jí)為Ⅲ類(lèi)，并對(duì)其安全性和有效性進(jìn)行審慎的考察。因此，企業(yè)并不以納米技術(shù)作為其產(chǎn)品的主要宣傳點(diǎn)，在這類(lèi)情況中，由于納米物質(zhì)具有某些優(yōu)異性能，或者在生產(chǎn)工藝中需要采用納米技術(shù)，從而可能產(chǎn)生一批沒(méi)有貼納米標(biāo)簽的，實(shí)質(zhì)上的納米產(chǎn)品。對(duì)于此類(lèi)產(chǎn)品，在技術(shù)審評(píng)工作中，首先要求審評(píng)人員具備一定的專(zhuān)業(yè)知識(shí)，能夠從企業(yè)遞交的注冊(cè)資料中準(zhǔn)確判斷產(chǎn)品中是否有納米物質(zhì)成分，或者在生產(chǎn)中采用了納米技術(shù)。為了準(zhǔn)確鑒別醫(yī)療器械中是否使用了納米材料，證明等同性非常重要?；瘜W(xué)成分的相似性并不足以證明納米材料的等同性，因?yàn)榧{米材料是否呈現(xiàn)出特定性質(zhì)可能取決于納米材料的化學(xué)成分和形狀，和(或)納米材料的來(lái)源(供貨方)。當(dāng)判定了產(chǎn)品確實(shí)是納米產(chǎn)品之后，對(duì)于其安全性和有效性的把握，需要具備必要的納米表征手段知識(shí)。對(duì)含有納米材料的醫(yī)療器械的生物學(xué)效應(yīng)的試驗(yàn)和評(píng)價(jià)要求對(duì)納米材料進(jìn)行全面表征。因?yàn)榧{米材料的毒性，不僅取決于其化學(xué)成分，也與其粒度(粒度分布)、長(zhǎng)徑比、形狀、表面形貌、表面電勢(shì)、表面化學(xué)、親水(疏水性)、團(tuán)聚(聚集)態(tài)等因素密切相關(guān)。因此，對(duì)于某些產(chǎn)品，可能需要根據(jù)掃描電鏡、透射電鏡、原子力顯微鏡、電感耦合等離子質(zhì)譜等表征手段所獲得的圖像和數(shù)據(jù)來(lái)判斷其安全性和有效性。應(yīng)該根據(jù)納米材料的類(lèi)型和形式，以及器械的預(yù)期用途來(lái)選取表征方法。對(duì)特定物理化學(xué)參數(shù)的表征通?？刹扇《喾N方法。單一的表征方法可能無(wú)法提供對(duì)于參數(shù)的準(zhǔn)確評(píng)估(例如:粒度分布、表面成分)。在該類(lèi)情況下，如果可行，可能需要采取補(bǔ)充方法來(lái)對(duì)需要表征的性質(zhì)進(jìn)行充分評(píng)估，即采用兩種獨(dú)立的表征方法。需要特別注意的是，用不同的方法獲取的有關(guān)特定性質(zhì)的結(jié)果不能直接進(jìn)行對(duì)比。例如，正如指導(dǎo)性文件所指出的，對(duì)于粒徑測(cè)定，應(yīng)至少采用兩種顯微鏡技術(shù)(例如:透射電鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡)。為了對(duì)使用納米技術(shù)的醫(yī)療器械進(jìn)行可靠的表征，需要毒理學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)、工程學(xué)和其他專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域的專(zhuān)家之間的跨專(zhuān)業(yè)合作。

1．2納米材料劑量

用于毒理學(xué)研究的劑量水平通常是以質(zhì)量濃度為基礎(chǔ)。然而，納米材料的多個(gè)屬性可能會(huì)影響其毒理性質(zhì)。普遍認(rèn)為，除了質(zhì)量濃度以外，還應(yīng)使用包括表面積和數(shù)量濃度在內(nèi)的其他參數(shù)來(lái)充分表征納米材料劑量。在確定用于納米材料體外研究的毒理學(xué)相關(guān)的劑量時(shí)，應(yīng)該考慮可分沉淀物的可能性。小納米顆粒(例如:水動(dòng)力學(xué)直徑＜40nm)與培養(yǎng)細(xì)胞層之間的接觸主要取決于擴(kuò)散和對(duì)流力。由于沉降力的額外影響，在細(xì)胞培養(yǎng)基中形成的稍大的納米材料和納米材料聚集體的沉淀速度更快。這些因素，以及與蛋白質(zhì)和培養(yǎng)基其他成分的相互作用，可能會(huì)影響直接接觸培養(yǎng)細(xì)胞的顆粒的數(shù)量。應(yīng)該根據(jù)具體情況評(píng)價(jià)可分沉淀物出現(xiàn)的可能性。若有必要，應(yīng)開(kāi)展對(duì)于體外細(xì)胞劑量的分析性或計(jì)算性評(píng)估。目前，對(duì)介質(zhì)中的劑量(分散/溶液濃度)或?qū)嶋H的納米顆粒細(xì)胞攝入/接觸量是否應(yīng)該被用于劑量本身的表達(dá)還存在爭(zhēng)議。

1．3納米材料參照樣品

試驗(yàn)結(jié)果的可靠性在一定程度上取決于是否可獲得適合的參照樣品。參照樣品指擁有一項(xiàng)或多項(xiàng)特性參數(shù)、具有足夠可重復(fù)性的已經(jīng)確認(rèn)的材料?？衫迷摬牧匣蛭镔|(zhì)對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，評(píng)估測(cè)量方法或?yàn)椴牧腺x值。納米尺度參照樣品的最初研發(fā)重點(diǎn)在于將其用于校準(zhǔn)試驗(yàn)儀器，而不是作為生物響應(yīng)基準(zhǔn)進(jìn)行參照樣品研發(fā)。開(kāi)發(fā)一種廣泛接受的參照樣品，包括在適合不同的試驗(yàn)系統(tǒng)的陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照納米顆粒方面達(dá)成共識(shí)，已經(jīng)成為納米材料風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的一個(gè)關(guān)鍵性要求。雖然參照樣品對(duì)于評(píng)估醫(yī)療器械中應(yīng)用的納米材料至關(guān)重要，但是因?yàn)榇嬖趯?shí)際困難，研發(fā)進(jìn)度還是很慢。認(rèn)識(shí)到納米材料代表性樣本的可用性對(duì)于納米物質(zhì)安全試驗(yàn)的可重復(fù)性和可靠性至關(guān)重要。ISO/TC229nm技術(shù)委員會(huì)已提出使用“代表性試驗(yàn)材料”，并且正對(duì)其進(jìn)行討論。代表性試驗(yàn)材料的擬議定義為“來(lái)自同一批的物質(zhì)，在其一個(gè)或多個(gè)特定性質(zhì)方面具有同質(zhì)性和穩(wěn)定性，被認(rèn)為適合于開(kāi)發(fā)用于針對(duì)除已表現(xiàn)出的同質(zhì)性和穩(wěn)定性以外的性質(zhì)的試驗(yàn)方法”。目前這種方法已被應(yīng)用于OECD人造納米材料工作組的納米材料安全性試驗(yàn)合作項(xiàng)目，該項(xiàng)目使用歐洲委員會(huì)聯(lián)合研究中心代表性納米材料庫(kù)中的代表性納米材料來(lái)進(jìn)行。

1．4納米材料樣品制備

納米材料體積小，并且其物理化學(xué)特性可能發(fā)生改變，這使得與宏觀(非納米尺度)顆?；蚧瘜W(xué)物質(zhì)的試驗(yàn)相比，納米材料的樣品制備會(huì)遇到重大的挑戰(zhàn)。帶來(lái)挑戰(zhàn)的因素包括能加強(qiáng)納米材料反應(yīng)性的表面性質(zhì);聚集或團(tuán)聚顆粒的形成;納米顆粒在通過(guò)水合作用，部分溶解或其他過(guò)程的分散中發(fā)生的轉(zhuǎn)變;以及低濃度水平污染物對(duì)納米材料的物理化學(xué)性質(zhì)和毒理性質(zhì)的強(qiáng)烈潛在影響。如同其他類(lèi)型的試驗(yàn)樣品，納米物體有可能吸附到容器表面。因此，確認(rèn)標(biāo)稱(chēng)濃度非常重要。對(duì)于研發(fā)針對(duì)含有納米材料的醫(yī)療器械的可靠的樣品制備方案來(lái)說(shuō)，必須認(rèn)識(shí)到這些問(wèn)題。相比于使用常規(guī)材料的醫(yī)療器械，解決這些問(wèn)題也許需要極大提高直接針對(duì)樣品制備的研發(fā)力度，并制定處理策略。由于其獨(dú)特的表面性質(zhì)，納米材料對(duì)用于樣品制備的技術(shù)表現(xiàn)出極強(qiáng)的敏感性。顆粒之間以及顆粒與周?chē)h(huán)境之間的相互作用會(huì)影響顆粒的分散。分散的納米材料不一定呈現(xiàn)單分散顆粒的形式。呈聚集形式的單分散顆粒(由強(qiáng)結(jié)合或強(qiáng)融合的顆粒組成的顆粒)和呈團(tuán)聚形式的非單分散顆粒(弱結(jié)合顆粒，聚集體，或兩者的混合體)可以出現(xiàn)在以液體、粉末和氣溶膠形式出現(xiàn)的納米材料中，除非通過(guò)表面電荷或立體效應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定化處理。因此，樣品中納米材料的分散狀態(tài)和粒度分布可能隨時(shí)間變化。這一屬性對(duì)于制備浸提液和(或)儲(chǔ)存溶液和劑量分散溶液有著非常重要的意義，pH值、離子強(qiáng)度或分子成分的輕微調(diào)整就可能顯著改變顆粒分散度?；谠撛?，受試品的穩(wěn)定性對(duì)于在生物評(píng)價(jià)中獲取具有代表性的和可重復(fù)性的結(jié)果來(lái)說(shuō)顯得尤為重要。納米材料的樣品制備可能包含對(duì)于制造商生產(chǎn)的或供應(yīng)商提供的材料的表征，以及制備用于動(dòng)物試驗(yàn)或體外實(shí)驗(yàn)的儲(chǔ)存溶液和劑量溶液。制備細(xì)節(jié)可能根據(jù)給藥途徑和遞送方法的不同而有所差別。

1．5納米材料對(duì)于生物相容性研究試驗(yàn)的影響

將納米材料用于試驗(yàn)系統(tǒng)時(shí)，必須認(rèn)識(shí)到需要測(cè)定的一些性質(zhì)可能會(huì)受到周?chē)h(huán)境的影響，并且在很大程度上依賴(lài)于周?chē)h(huán)境(例如:組織培養(yǎng)基、血液/血清、蛋白質(zhì)存在)。與環(huán)境的相互作用可能導(dǎo)致納米材料本身發(fā)生暫時(shí)性改變，如通過(guò)獲得/脫落蛋白涂層，形成納米顆粒團(tuán)聚/聚集，或納米材料其它方面的變化。由于這樣的變化可能會(huì)影響納米材料的特性，因此會(huì)影響納米材料的毒性特征。因此，納米材料應(yīng)完全根據(jù)制造出來(lái)的形態(tài)/組成，以及最終用戶(hù)所接收的形式(如果該形式包含自由納米材料)進(jìn)行表征。最后，還應(yīng)該對(duì)最終產(chǎn)品中的納米材料進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于生物安全性評(píng)價(jià)，需要將納米材料分散在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中進(jìn)行評(píng)價(jià)。這些介質(zhì)與納米材料之間的相互作用可嚴(yán)重影響到納米材料在試驗(yàn)系統(tǒng)中的表現(xiàn)。應(yīng)該在試驗(yàn)過(guò)程和試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)過(guò)程中考慮該因素。納米物體在生物環(huán)境中很容易將蛋白質(zhì)迅速吸附在其表面，形成所謂的蛋白質(zhì)“冕暈”。據(jù)報(bào)道，冕暈是由兩層結(jié)構(gòu)組成，內(nèi)層是由強(qiáng)結(jié)合的蛋白質(zhì)組成，而外層是由快速交換的分子組成。蛋白質(zhì)冕暈并不是靜態(tài)的，可能根據(jù)納米材料所處環(huán)境的不同而發(fā)生改變。作為有機(jī)體內(nèi)的異物，納米材料的歸宿為從被吸收、分布、代謝到排泄/消除。眾所周知，納米材料表現(xiàn)出與其對(duì)應(yīng)的常規(guī)材料不同的物理化學(xué)特性(力學(xué)、化學(xué)、磁學(xué)、光學(xué)或電學(xué)特性)，因此，可以合理的期望納米尺度材料會(huì)影響生物學(xué)行為，并且生物學(xué)行為會(huì)引發(fā)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和生物分子層面(例如:基因和蛋白質(zhì))包括細(xì)胞攝取的各種不同反應(yīng)。因此，與由常規(guī)材料引發(fā)的毒理學(xué)反應(yīng)所不同的各種毒理學(xué)反應(yīng)可能在接觸到納米材料后才會(huì)顯現(xiàn)。應(yīng)該注意的是，不僅蛋白質(zhì)會(huì)以冕暈形式參與這個(gè)過(guò)程，而且脂質(zhì)也會(huì)參與這個(gè)過(guò)程。因此，毒物動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)被視作針對(duì)含有納米材料的醫(yī)療器械開(kāi)展的毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的一個(gè)部分。當(dāng)接觸到生物環(huán)境的時(shí)候，納米材料會(huì)與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用，這種相互作用的定量和定性水平取決于生理環(huán)境的性質(zhì)(例如，血液、血漿、細(xì)胞質(zhì)等)和納米材料的特性。同樣，當(dāng)接觸到試驗(yàn)介質(zhì)的時(shí)候，納米材料也會(huì)與周?chē)h(huán)境發(fā)生相互作用并且/或者也會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生干擾，這取決于其本身的性質(zhì)和所接觸的條件;跟相應(yīng)的常規(guī)材料相比，它們可能會(huì)有不同的表現(xiàn)。因此，對(duì)于任何被設(shè)計(jì)用來(lái)對(duì)醫(yī)療器械進(jìn)行生物學(xué)評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法，對(duì)其進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的驗(yàn)證是十分有必要的。試驗(yàn)方法的選擇將取決于納米材料的特性。在納米材料的毒性試驗(yàn)中，有幾個(gè)已知的風(fēng)險(xiǎn)因素應(yīng)該避免。對(duì)納米材料的毒性和最終結(jié)局了解的還不多，所以一些未知的隱患還會(huì)在將來(lái)逐漸顯露出來(lái)。由于納米材料的毒性試驗(yàn)存在許多不確定性，所以公開(kāi)透明變得至關(guān)重要。潛在的生物相互作用不是直接取決于分子的濃度或數(shù)量，而是取決于納米顆粒本身。在納米毒理學(xué)中，劑量反應(yīng)關(guān)系的單位可能不是傳統(tǒng)意義的質(zhì)量單位，而可能是以納米顆粒的數(shù)量或者他們的總表面積來(lái)表示劑量。除了表征以外，還應(yīng)該以文件的形式記錄下實(shí)驗(yàn)條件的詳細(xì)情況。

2納米材料標(biāo)準(zhǔn)化工作

納米粉體范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 肝炎病素 乙型 微RNAs 預(yù)測(cè)

0引言

MicroRNA是一類(lèi)21～23 nt長(zhǎng)的非編碼單鏈小分子RNA，是由priRNA分子經(jīng)過(guò)剪切成為70～90個(gè)堿基大小、具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)單鏈RNA的前體（premiRNA），再經(jīng)Dicer酶加工生成［1］. MicroRNA廣泛存在于真核生物中，迄今為止在人體中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了至少320種MicroRNA分子. MicroRNA通過(guò)與mRNA的3′非編碼區(qū)相互作用調(diào)控基因表達(dá)，在機(jī)體的生理及病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用. 最近研究表明，一些病毒的基因組，如皰疹病毒、腺病毒、HIV，也能編碼MicroRNA［2］. HBV基因組能否編碼MicroRNA分子目前還不清楚. 本研究中，我們借助于預(yù)測(cè)軟件VMir，對(duì)HBV全基因組進(jìn)行正反兩個(gè)方向的掃描，尋找HBV基因中編碼microRNA前體分子，對(duì)HBV編碼的microRNA分子進(jìn)行初步預(yù)測(cè)，并通過(guò)Northern blot實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行初步鑒定.

1材料和方法

1.1材料預(yù)測(cè)軟件VMir由加利福尼亞大學(xué)Grundhoff AT教授惠贈(zèng). HBV全基因序列檢索自Genebank，序列號(hào)為NC_003977，adr型. HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞均購(gòu)自ATCC. HepG2細(xì)胞培養(yǎng)選用含100 mL/L胎牛血清（Hyclone）RPMI 1640培養(yǎng)液（Gibco）. HepG2.2.15細(xì)胞選用含相同血清濃度的培養(yǎng)液，另外加入終濃度380 mg/L的G418 (Sigma). 上述兩種細(xì)胞均在37℃的含50 mL/L CO2孵箱中培養(yǎng). Trizol購(gòu)自Invitrogen公司. Northen blot所用尼龍膜購(gòu)自Ambion公司. ［γ32P］ ATP購(gòu)自北京福瑞生物工程公司.

1.2方法

1.2.1預(yù)測(cè)軟件VMir工作原理VMir是由Grundhoff AT等［3-4］創(chuàng)建的一種病毒編碼MicroRNA前體分子預(yù)測(cè)方法. 工作原理為：病毒基因序列以500 nt為一個(gè)窗口，10 nt遞進(jìn)掃描；RNAfold算法預(yù)測(cè)窗口內(nèi)的發(fā)卡結(jié)構(gòu)；限定發(fā)卡結(jié)構(gòu)長(zhǎng)度，按照以下規(guī)則評(píng)分：每個(gè)互補(bǔ)的堿基對(duì)獎(jiǎng)勵(lì)2分；末端環(huán)狀結(jié)構(gòu)超過(guò)17個(gè)堿基時(shí)，每超一個(gè)，減1分；對(duì)于對(duì)稱(chēng)性隆起，減去堿基數(shù)×1(堿基數(shù)≤4)或堿基數(shù)×1.5(堿基數(shù)﹥4) ；對(duì)于非對(duì)稱(chēng)性隆起，減去堿基數(shù)×2. 經(jīng)上述處理，每個(gè)發(fā)卡結(jié)構(gòu)得到一基數(shù)，再乘以系數(shù)Ip得到最終分值. 再進(jìn)一步限定分值及其窗口出現(xiàn)頻率（一般限定最低分值為115，窗口值即在不同窗口中出現(xiàn)的頻率為35，因在該條件下成功預(yù)測(cè)概率為98%［4］），最終得到病毒基因編碼的microRNA前體分子. 該方法已經(jīng)成功預(yù)測(cè)出KSHV（卡普西肉瘤相關(guān)病毒）、EBV（EB病毒）等編碼的microRNA前體分子.

1.2.2利用VMir預(yù)測(cè)HBV編碼的microRNA前體分子將HBV全基因序列(NC_003977)導(dǎo)入VMir軟件，設(shè)定窗口大小為500 nt，遞進(jìn)單位為10 nt，發(fā)卡結(jié)構(gòu)長(zhǎng)度設(shè)為100 nt，對(duì)HBV基因組中能夠形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的序列進(jìn)行初篩. 然后，設(shè)定以每個(gè)序列最低得分為115，其窗口值最低為35，得到HBV可能編碼的microRNA前體分子.

1.2.3預(yù)測(cè)前體分子的初步驗(yàn)證我們選用Northern blot方法對(duì)經(jīng)VMir軟件篩選到的候選分子進(jìn)行初步驗(yàn)證. 所用探針序列為候選microRNA分子的反相互補(bǔ)序列，用T4多聚核苷酸激酶末端標(biāo)記放射性標(biāo)記γ32P. 以穩(wěn)定表達(dá)HBV的HepG2.2.15為研究對(duì)象，以HepG2細(xì)胞作為對(duì)照，按照試劑說(shuō)明書(shū)，利用Trizol試劑提取總RNA. 取40 μg總RNA進(jìn)行150 g/L TBE尿素凝膠電泳；再經(jīng)半干轉(zhuǎn)運(yùn)至尼龍膜后，利用上述標(biāo)記探針雜交、放射自顯影. 如果經(jīng)VMir預(yù)測(cè)到的候選分子是HBV基因編碼的microRNA前體分子，那么來(lái)自于HepG2.2.15細(xì)胞的總RNA與探針雜交后，應(yīng)出現(xiàn)兩條特異性的條帶：分子量較大的一條為microRNA前體分子，較小的一條為成熟的microRNA分子. 因?yàn)閙icroRNA前體分子在Dicer酶作用下產(chǎn)生成熟的microRNA分子，而剩余的核苷酸將迅速被降解，故一般只有兩條特異性條帶. 而來(lái)源于HepG2細(xì)胞的總RNA與探針雜交后則沒(méi)有特異性條帶產(chǎn)生.

2結(jié)果

2.1HBV基因組中microRNA前體分子預(yù)測(cè)將HBV基因序列導(dǎo)入VMir軟件后，設(shè)定窗口大小為500 nt，以10 nt為遞進(jìn)單位，尋找HBV基因中的發(fā)卡結(jié)構(gòu)序列. 共查找到56個(gè)寡核苷酸分子，其中在正向序列中有25條（MD1～25），反向序列31條（MR1～31）. 然后分別設(shè)定窗口值和最低分值為35和115，篩選出HBV最有可能編碼的microRNA分子前體序列，最終得到了三個(gè)候選分子，即MD6， MD17和MR31(表1). 上述3個(gè)序列經(jīng)RNAfold程序分析，得到二級(jí)結(jié)構(gòu)（圖1），表明這三條序列能形成典型的發(fā)卡樣結(jié)構(gòu). 總之，從這三條序列的評(píng)分、窗口值及其二級(jí)結(jié)構(gòu)，都提示他們可能是HBV基因組編碼的microRNA前體分子；提示HBV同EBV， KSHV相似，也可能編制病毒來(lái)源的microRNA分子. 表1 HBV基因組中的候選

2.2microRNA前體分子的初步驗(yàn)證為了進(jìn)一步證實(shí)MD6，MD17和MR31三個(gè)候選分子是否為HBV基因組編碼的microRNA前體分子. 我們分別以MD6， MD17和MR31的反向互補(bǔ)的核苷酸序列，即TGGTAATAGAG GTAAAAAGGGACTCAAGATGTTGTACAGACTTGGCCCCCAATACCACATCATCCA，TCAA TGTCCATGCCCCAAAGCCACCCAAGGCACAGCTTGGAGGCTTGAACAGTAGGACATGAA CATGA和CCTCCTTTCCTCACATTCATTTACAGGAGGACATTATTAATAGATGTCAACAAT ATGTGGGCCCTCTGACAGTTAATGAAAAAAGGAGA作為探針，末端標(biāo)記γ32P放射標(biāo)記，分別HepG2細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)HBV病毒顆粒HepG2.2.15細(xì)胞的總RNA為雜交模板進(jìn)行Northern blot實(shí)驗(yàn). HepG2.2.15細(xì)胞總RNA只有與MD17互補(bǔ)的探針雜交后產(chǎn)生兩條特異性的條帶（圖1C），而與MD6（圖1A）和MR31（圖1B）互補(bǔ)的探針雜交則沒(méi)有特異性條帶產(chǎn)生. 因此，提示MD17(TCATGTTCATGTCCTACTGTTCAAGCCTCCAAGC TGTGCCTTGGGTGGCTTTGGGGCATGGACATTGA)可能為HBV基因編碼的miroRNA前體分子.

3討論

microRNAs是一類(lèi)非編碼的小RNA分子，長(zhǎng)度約為21～23 nt. 已經(jīng)被鑒定的microRNAs據(jù)推測(cè)大都是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)、約70個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成的，有5′端磷酸基和3′羥基，定位于RNA前體的3′端或者5′端. 自從第一個(gè)miRNA (lin4和let7)分子在線蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn)［5］，迄今為止在包括人類(lèi)、果蠅、植物等多種生物物種中鑒別出的microRNA數(shù)量已超過(guò)3500個(gè)［6］. microRNA通過(guò)與mRNA的3′非編碼區(qū)的相互作用，參與基因的表達(dá)調(diào)控，在人類(lèi)基因中至少有1/3受microRNAs調(diào)控，在生理和病理過(guò)程中均具有重要作用［7-8］.

同其人類(lèi)、果蠅、植物等多種生物物種一樣，許多類(lèi)似于HBV的DNA病毒也能編碼病毒基因組來(lái)源microRNAs，如皰疹病毒家族的非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒、卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒、人巨細(xì)胞病毒，多瘤病毒屬的肉瘤病毒40、鼠多瘤病毒，均能編碼病毒特異性的microRNAs分子；這些病毒編碼的microRNAs分子通過(guò)調(diào)控宿主細(xì)胞中或病毒本身特定基因的表達(dá)，使宿主細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的有利于病毒的復(fù)制、傳播，有利于病毒逃逸宿主的免疫系統(tǒng)，最終達(dá)到保護(hù)自己的目的［9-10］.

鑒于病毒編碼的microRNAs在病毒生活周期中的重要意義，在某種程度上我們可以推測(cè)，HBV作為一種常見(jiàn)的影響人類(lèi)健康的致病病毒，也可能編碼自己的microRNAs分子. VMir是由Grundhoff AT等研發(fā)的一種用來(lái)預(yù)測(cè)病毒編碼microRNAs的軟件，他們已經(jīng)通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)該軟件可以有效地預(yù)測(cè)病毒編碼的microRNA前體分子，進(jìn)而達(dá)到預(yù)測(cè)病毒編碼microRNA分子的目的. 我們借助該預(yù)測(cè)軟件，對(duì)HBV的基因進(jìn)行掃描，以期得到HBV編碼的microRNA前體分子. 經(jīng)過(guò)篩選，最終我們得到了3條候選核苷酸序列，即MD6， MD17和MR31. 這3條寡核苷酸分子無(wú)論從其評(píng)分還是結(jié)構(gòu)都符合microRNA前體分子的條件. 然后，我們分別以MD6，MD17和MR31的反向互補(bǔ)序列為探針，與HepG2.2.15細(xì)胞的總RNA雜交，以HepG2細(xì)胞的總RNA為陰性對(duì)照，進(jìn)行Northern Blot實(shí)驗(yàn). 結(jié)果提示，只有MD17特異性探針有兩條特異性條帶產(chǎn)生，因此提示MD17很有可能就是HBV編碼microRNAs的前體分子. 在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，我們將通過(guò)Northern blot， RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)等手段來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證MD17分子，并在此基礎(chǔ)上找到其編碼的成熟microRNAs分子.

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納米粉體范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 川芎嗪； 尼莫地平； 雙載藥納米粒； 藥動(dòng)學(xué)； 腦內(nèi)分布

Pharmacokinetics and brain distribution of NMD/TMPnanoparticles

HE Wenjie1， HONG Qian1， LIANG Jing1， HE Xiaowei2， ZHU Fengjia1*

（1. Zhejiang Hospital， Hangzhou 310012， China；

2. The First Hospital Affiliated to Huzhou Teachers′ University， Huzhou 313000， China）

[Abstract] This study aims to prepare nimodipine/tetramethylpyrazineloaded poly（D， Llactidecoglycolide） dualdrug nanoparticles （NMD/TMPNPs） and investigate pharmacokinetics and brain distribution to evaluate the possibility of enhancing the drug effect of dualdrug nanoparticles. NMD/TMPNPs were prepared via W/O/W emulsion solvent evaporation. Entrapment efficiency and drug loading of NMD/TMPNPs were investigated by ultracentrifugation， and drug release behavior in vitro was studied by dialysis method. The pharmacokinetic and brain distribution were studied in SD mice administered intravenously with NMD/TMPNPs in comparison with NMDsuspension， NMD/TMPsuspension and NMDNPs， （NMDNPs+TMP）suspension. According to the results， the entrapment efficiency and drug loading of NMD were （79.71±0.73）%， （1.74±0.02）%， those of TMP were （40.26±1.51）% and （4.38±0.16）%. The nanoparticles showed the property of sustained release. On the basis of the major parameters for in vivo pharmacokinetic and brain distribution， t1/2β of NMDsuspension， NMD/TMPsuspension and NMDNPs， （NMDNPs+TMP）suspension， NMD/TMPNPs were （1.097±0.146）， （1.055±0.06）， （1.950±0.140）， （1.860±0.096）， （2.497±0.475） h， CL were （0.778±0.098）， （1.133±0.111）， （0.247±0.023）， （0.497±0.040）， （0.297±0.024） h?L-1， AUC0t in rat plasma were （514.218±60.383）， （352.916±33.691）， （1 618.429±240.198）， （804.110±75.804）， （1 349.058±215.497） μg?h?L-1， respectively， and AUC0t in brain were 0.301 9， 0.624 8， 1.068 6， 1.313 0， 1.046 5 mg?h?L-1， respectively. According to the in vivo study， the pharmacokinetic behavior of NMD were markedly prolonged by adding TMP or prepared dualdrug nanoparticles.

[Key words] nimodipine； tetramethylpyrazine； dualdrug nanoparticle； pharmacokinetics； brain distribution

doi：10.4268/cjcmm20162227

川芎嗪（tetramethylpyrazine，TMP）為一類(lèi)具有多藥耐藥逆轉(zhuǎn)（multidrug resistance，MDR）調(diào)節(jié)功能的吡嗪類(lèi)生物堿，具有疏通血脈、促進(jìn)血行、消散淤血的功效，臨床上多用于擴(kuò)張腦血管、抑制血小管平滑肌痙攣等。文獻(xiàn)表明川芎嗪具有限制Pglycoprotein（Pgp）底物外排的作用[1]，可通過(guò)抑制Pgp的ATP酶活性來(lái)抑制Pgp的功能[23]。尼莫地平（nimodipine，NMD）為一類(lèi)二氫吡啶類(lèi)鈣離子拮抗劑，臨床上多用于治療腦血管疾病[4]，但其作為Pgp的底物，易受血腦屏障（bloodbrain barrier，BBB）上Pgp外排作用影響，致使其腦內(nèi)濃度較低[5]。因此將TMP與NMD合用，有望提高NMD腦內(nèi)濃度，但NMD和TMP簡(jiǎn)單合用，一方面由于TMP血漿清除率較高[6]且易被腦組織清除[7]，限制了其抑制Pgp功能的作用；另一方面，短時(shí)間內(nèi)TMP濃度過(guò)高易導(dǎo)致腦內(nèi)NMD濃度過(guò)高，對(duì)正常細(xì)胞或組織產(chǎn)生毒性[8]，故本試驗(yàn)擬制備川芎嗪/尼莫地平雙載藥納米粒合用兩藥，并考察川芎嗪對(duì)尼莫地平體內(nèi)過(guò)程的影響。

1 材料

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）； Labconco冷凍干燥機(jī)（美國(guó)Labconco公司）；TGL16G高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；VORTEX5型渦旋混合器（海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司）；減壓干燥器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

聚乙二醇（聚乳酸羥基乙酸）（濟(jì)南岱罡生物工程有限公司，相對(duì)分子質(zhì)量18 000）；尼莫地平對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)10027020002）；尼莫地平原料藥（湖北恒碩藥業(yè)有限公司，純度98%，批號(hào)20130625）；鹽酸川芎嗪對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110817201006）；鹽酸川芎嗪原藥（南通飛宇生物有限公司，純度98%，批號(hào)FY17610610）；甲醇（美國(guó)Honeywell Burdick&Jackson公司）；肝素鈉（中國(guó)江蘇常州千紅生化制藥股份有限公司，批號(hào)110921）；水合氯醛（上海強(qiáng)順化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20090401）；生理鹽水（石家莊鵬海制藥有限公司，批號(hào)1208122040）；乙腈（天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)30333203514）；乙醚（中國(guó)杭州化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20100421）；正己烷（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20131023）；其他試劑均為分析純。

清潔級(jí)SD大鼠（220±10） g，浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物使用編號(hào)SCXK（浙20080036）。所有動(dòng)物試驗(yàn)均按照浙江大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用指南進(jìn)行。

2 方法與結(jié)果

2.1 尼莫地平/川芎嗪雙載藥納米粒的制備

2.1.1 雙載藥納米粒的制備方法 稱(chēng)取1 mg NMD和40 mg mPEGPLGA溶于乙酸乙酯中構(gòu)成有機(jī)相，稱(chēng)取5 mg TMP溶于水中構(gòu)成內(nèi)水相，稱(chēng)取適量PVA溶于水中構(gòu)成外水相（調(diào)節(jié)pH為9.0），稱(chēng)取適量PVA溶于水中構(gòu)成分散相。將內(nèi)水相加入到有機(jī)相中超聲獲得初乳，將初乳迅速加入至外水相中超聲獲得復(fù)乳，將復(fù)乳滴加到分散相中攪拌即得到NMD/TMPNPs。

2.1.2 雙載藥納米粒的質(zhì)量評(píng)價(jià) 經(jīng)2.1.1工藝制備的NMD/TMPNPs外觀呈類(lèi)圓形，表面光滑，粒徑小（176 nm左右），粒徑分布窄（PDI

2.1.3 雙載藥納米粒的體外釋放考察 本試驗(yàn)采取透析法考察其體外釋放特性。NMD/TMPNPs體外釋放過(guò)程中NMD和TMP均符合Weibull方程，分別為Q=0.504t-1.898 4（R2=0.987 6）和Q=0.513 5t-1.608 9（R2=0.988 4）。其體外釋放曲線見(jiàn)圖1。

2.2 體內(nèi)尼莫地平的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Thermo Hypersil Gold C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相甲醇水（62∶38），流速1.0 mL?min-1；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)238nm；進(jìn)樣體積20 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取適量NMD，TMP于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得NMD/TMP對(duì)照品溶液。

2.2.3 血漿樣品處理方法 精密移取血漿樣品200 μL置2 mL具塞離心管中，加入乙腈800 μL，渦旋混合3 min，1萬(wàn) r?min-1離心10 min，取上清液于40 ℃用氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?00 μL甲醇溶解，充分渦旋振蕩后1萬(wàn) r?min-1離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣分析。

2.2.4 腦組織樣品處理方法 將腦組織按1∶4加入生理鹽水，高速勻漿器8 000 r?min-1勻漿10 min，取勻漿100 μL于2 mL離心管中，加入乙醚正己烷（1∶1）1.5 mL，渦旋5 min，超聲10 min后，5 000 r?min-1離心10 min，取上清液于2 mL離心管中用氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?00 μL甲醇溶解，充分渦旋后1萬(wàn) r?min-1離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣分析。

2.2.5 血漿內(nèi)NMD含量測(cè)定方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密稱(chēng)取減壓干燥至恒重的NMD對(duì)照品適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配成質(zhì)量濃度為1 427 mg?L-1的對(duì)照品溶液，臨用前稀釋至系列濃度。精密吸取空白血漿1 mL 7份，分別加入系列濃度的對(duì)照品溶液20 μL，渦旋混合，得質(zhì)量濃度分別為0.356 7，0.713 5，1.783 7，3.567 5，7.135 0，17.837，35.675，71.350，142.70 mg?L-1的NMD系列血漿對(duì)照溶液，按2.2.3項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）對(duì)血漿中NMD的濃度（C）進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。計(jì)算得血漿中NMD的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=73.823C-23.23（r=0.999 3），表明NMD血漿質(zhì)量濃度在0.356 7～142.70 mg?L-1線性關(guān)系關(guān)系良好。

精密度：取低、中、高3個(gè)濃度供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，分別在日內(nèi)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定5 d（每天1次），計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。其日內(nèi)精密度分別為4.7%，2.4%，2.9%，日間精密度分別為3.7%，2.9%，2.8%。

提取回收率：精密量取含NMD低、中、高3個(gè)濃度的NMD/TMP溶液，加入200 μL空白血漿中，渦旋2 min，混勻，配成質(zhì)量濃度為50.00，100.00，200.00 μg?L-1的血漿樣品，按2.2.3項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析；另配制含NMD低、中、高3個(gè)相同濃度的NMD/TMP對(duì)照品溶液，不加空白血漿，直接揮干進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算血漿樣品經(jīng)處理后的峰面積與對(duì)照溶液峰面積的比值，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次。其提取回收率為（69.33±5.24）%，（72.88±6.99）%，（72.53±2.03）%。

2.2.6 腦組織內(nèi)NMD含量測(cè)定方法 腦組織標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密稱(chēng)取減壓干燥至恒重的NMD對(duì)照品適量，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配成質(zhì)量濃度為15.00 mg?L-1的對(duì)照品溶液，臨用前稀釋至系列濃度。精密吸取空白組織勻漿100 μL 8份，分別加入系列濃度的對(duì)照品溶液20 μL，渦旋混合，得質(zhì)量濃度分別為0.01，0.03，0.06，0.15，0.60，1.50，3.00，6.00 mg?L-1的NMD系列組織勻漿對(duì)照溶液，按2.2.4項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）對(duì)組織中NMD的濃度（C）進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。計(jì)算得組織勻漿中NMD的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=110.32C+4.351 2（r=0.999 8），表明NMD組織勻漿質(zhì)量濃度在0.01～6.00 mg?L-1線性關(guān)系良好。

精密度考察：取低、中、高3個(gè)濃度供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，分別在日內(nèi)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定5 d（每天1次），計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。其日內(nèi)精密度分別為6.9%，4.2%，4.0%，日間精密度分別為4.0%，3.2%，3.1%。

提取回收率考察：精密量取含NMD低、中、高3個(gè)濃度的NMD/TMP溶液，加入200 μL空白腦組織中，渦旋2 min，混勻，配成質(zhì)量濃度為0.01，0.15，1.50 mg?L-1的血漿樣品，按2.2.4項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析；另配制含NMD低、中、高3個(gè)相同濃度的NMD/TMP對(duì)照品溶液，不加空白血漿，直接揮干進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算血漿樣品經(jīng)處理后的峰面積與對(duì)照溶液峰面積的比值，每個(gè)濃度平行測(cè)定3次。其提取回收率為（72.38±6.04）%，（76.97±4.54）%，（78.26±2.66）%。

2.3 體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

稱(chēng)取適量NMD和NMD/TMP原藥粉末于10 mL量瓶中，用適量乙醇超聲溶解，用0.9%生理鹽水稀釋至刻度，得NMD混懸液和NMD/TMP混懸液。稱(chēng)取適量NMDNPs和NMD/TMPNPs凍干粉于10 mL量瓶中，用適量0.9%生理鹽水超聲溶解并稀釋至刻度，得NMDNPs和NMD/TMPNPs混懸液。稱(chēng)取適量NMDNPs和TMP原藥粉末于10 mL量瓶中，用適量0.9%生理鹽水超聲溶解并稀釋至刻度，得（NMDNPs+TMP）混懸液。

取健康SD大鼠30只，禁食12 h，自由飲水，隨機(jī)分為5組，每組6只。按NMD 2 mg?kg-1單劑量尾靜脈注射分別給予NMD混懸液、NMD/TMP混懸液、NMDNPs混懸液、NMD/TMPNPs混懸液和（NMDNPs+TMP）混懸液，給藥后分別于5，15，30，60，120，240，360，480，600，720 min經(jīng)股動(dòng)脈取血0.5 mL，置肝素鈉預(yù)處理的2 mL具塞離心管中， 6 000 r?min-1離心5 min，分離血漿后，置-80 ℃低溫冰箱保存待測(cè)。每次取血后立即用注射器給予等量的0.9%生理鹽水。

大鼠尾靜脈注射N(xiāo)MD混懸液、NMD/TMP混懸液、NMDNPs混懸液、NMD/TMPNPs混懸液和（NMDNPs+TMP）混懸液后，平均血藥濃度時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。數(shù)據(jù)經(jīng)擬合后符合開(kāi)放式二室模型，所得主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.4 腦組織分布研究

稱(chēng)取適量NMD原料藥于10 mL量瓶中，用適量乙醇超聲溶解后，加入0.9%生理鹽水稀釋至刻度，得NMD混懸液。稱(chēng)取適量NMD原料藥和TMP原料藥于10 mL量瓶中，用適量乙醇超聲溶解后，加入0.9%生理鹽水稀釋至刻度，得NMD/TMP混懸液。稱(chēng)取適量NMDNPs和NMD/TMPNPs凍干粉于10 mL量瓶中，用適量0.9%生理鹽水超聲溶解并稀釋至刻度，分別得NMDNPs混懸液和NMD/TMPNPs混懸液。稱(chēng)取適量NMDNPs凍干粉和TMP原料藥溶于10 mL量瓶中，用適量0.9%生理鹽水超聲溶解并稀釋至刻度，得（NMDNPs+TMP）混懸液。

取健康SD大鼠60只，禁食12 h，自由飲水，隨機(jī)分為5組，每組12只，按NMD 2 mg?kg-1單劑量尾靜脈注射分別給予NMD混懸液、NMD/TMP混懸液、NMDNPs，NMD/TMPNPs和（NMD/TMPNPs+TMP），給藥后分別于0.25，2，4，6 h（每個(gè)時(shí)間點(diǎn)平行3只大鼠）頸椎脫臼處死，迅速取出腦組織用生理鹽水沖洗，然后用濾紙吸干，置-80 ℃低溫冰箱保存待測(cè)。

大鼠尾靜脈注射N(xiāo)MD混懸液，NMD/TMP混懸液，NMDNPs，NMD/TMPNPs和（NMDNPs+TMP）后，按上述方法操作，并按2.2.6項(xiàng)下方法處理樣品后進(jìn)樣分析。結(jié)果見(jiàn)圖3，NMD混懸液，NMD/TMP混懸液，NMDNPs，NMD/TMPNPs和（NMDNPs+TMP）中腦內(nèi)AUC0t分別為0.301 9，0.624 8，1.068 6，1.313 0，1.046 5 mg?h?L-1。

由圖3可知，給藥0.25 h時(shí)，NMD/TMPNPs組在腦內(nèi)藥物濃度達(dá)到最大值（0.713 2±0.070 3） mg?L-1；給藥4 h時(shí)，（NMDNPs+TMP）組在腦內(nèi)藥物濃度達(dá)到最大值（0.343 4±0.148 2） mg?L-1；給藥6 h時(shí)，NMDNPs組在腦內(nèi)藥物濃度達(dá)到最大值（0.345 2±0.025 9）mg?L-1；給藥4 h時(shí)，在試驗(yàn)條件下NMD組和NMD/TMP組在腦內(nèi)均未檢測(cè)到藥物。

3 討論

藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果顯示：與單用NMD組相比，兩藥聯(lián)用組t1/2α顯著降低（P

組織分布研究結(jié)果顯示：與單藥組比較，雙藥組入腦速度均更快，AUC0t均顯著提高（P

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納米粉體范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 依那普利；替米沙坦；糖尿病早期腎病

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.11.609 文章編號(hào)：1004-7484（2013）-11-6631-02

糖尿病腎?。―N）是糖尿?。―M）患者最重要的合并癥之一，在西方國(guó)家糖尿病腎病已成為ESRD的主要原因[1]。近幾年我國(guó)的發(fā)病率亦呈上升趨勢(shì)，已經(jīng)成為終末期腎病（ESRD）的首要原因。在腎病早期進(jìn)行干預(yù)治療能阻止ESRD的發(fā)生。通過(guò)依那普利聯(lián)合替米沙坦治療對(duì)UAER等指標(biāo)的改善，分析依那普利聯(lián)合替米沙坦治療早期DN的臨床療效，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 合并糖尿病早期腎病的2型糖尿病105例患者，均為我院住院或門(mén)診長(zhǎng)期隨訪的2型DM患者，其中男53例，女52例，年齡41-66，均齡48歲，病程4-17年。患者均符合WHO制定的2型DM診斷標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，早期尿白蛋白排泄率（UAER）為30-200ug/min；近期血糖控制為空腹血糖

1.2 方法 各組均采用原有的糖尿病治療方案不變，注射胰島素、口服降糖藥使空腹血糖維持在3.8-7.1mmol/L。隨機(jī)分為3組各35人，分別為依那普利組、替米沙坦組及聯(lián)合治療組（依那普利聯(lián)合替米沙坦）。依那普利組給予依那普利10mg/d治療；替米沙坦組給予替米沙坦80mg/d治療；聯(lián)合治療組給予依那普利10mg/d和替米沙坦80mg/d治療，用藥時(shí)間都在早餐前30min用藥。治療時(shí)間為14周。

1.3 觀察指標(biāo) 治療前后3組MAP、FBG、UAER、BUN、SCR水平。各組間患者性別、年齡、病程、綜合治療方法差異均無(wú)顯著性（P>0.05）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量指標(biāo)用（χ±s）表示，各組治療前后及組間對(duì)照用t檢驗(yàn)，P

2 結(jié) 果

依那普利組和替米沙坦組MAP、UAER比治療前降低（P

3 討 論

DN是糖尿病微血管病變導(dǎo)致的腎小球硬化，是引起ESRD并導(dǎo)致患者死亡的主要原因。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，因高血糖環(huán)境下微血管病變所致，RAAS的異常激活在糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，特別是血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）。RAAS可引起血壓升高，腎小球內(nèi)壓力增高，以致于蛋白尿及腎臟硬化、纖維化、且促使炎癥介質(zhì)和纖維化介質(zhì)的釋放，加速腎臟病變速度[2]。研究表明AngⅡ?qū)δI小球細(xì)胞轉(zhuǎn)型、小管細(xì)胞增生、尿蛋白的排出方面的作用，可能通過(guò)AT2R而發(fā)揮功效，因此AT1RA也不能完全阻止AngⅡ的作用，故此類(lèi)藥物聯(lián)合應(yīng)用具有很好的效應(yīng)。本研究表明在依那普利、替米沙坦和聯(lián)合治療組3組間治療前后FBG、BUN、SCR均無(wú)顯著性差異，而3組MAP治療后較治療前均顯著下降，聯(lián)合治療組與依那普利、替米沙坦組間比較有顯著性差異。3組UAER治療后均較治療前有顯著下降，且聯(lián)合治療組UAER下降幅度明顯大于依那普利和替米沙坦組，這說(shuō)明聯(lián)合治療具有降低血壓和減少UAER的作用。這一結(jié)果說(shuō)明依那普利聯(lián)合替米沙坦治療2型糖尿病早期腎病比單一用藥更能有效減少UAER，延緩2型糖尿病早期腎病的發(fā)展，起到對(duì)腎功能的保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)